Precision gRNA 合成试剂盒是一套完整系统，可以快速合成向导 RNA (gRNA)，以备和 TrueCut™ Cas9 蛋白 v2 形成复合物，用于可直接转染的 Cas9 蛋白/gRNA 核糖核酸蛋白 (Cas9 RNP)。这种 Cas9 RNP 规格和 TrueCut Cas9 蛋白 v2 已经在多种悬浮液和贴壁细胞系中进行测试，具有 >70% 的切割效率且无毒性迹象。从用于编制靶序列的两个短单链寡核苷酸开始，gRNA 模板能与 T7 启动子在用时较短的‘一锅煮’ PCR 反应中进行组装。随后将完成组装的产物用作体外转录 (IVT) 反应的模板，然后通过快速纯化步骤即可在短短4小时内生成可直接转染的 gRNA。得到的 gRNA 也可以与我们的即用型转染 Invitrogen™ CRISPR 核酸酶 mRNA 进行共转染。蛋白和 mRNA Cas9 规格均无需进行质粒操作，因而适用于高通量、多通路的全基因组细胞基因改造方法。

Precision gRNA 合成试剂盒的特点包括：
•短短四小时内即可快速组装及合成包括模板组装在内的任何 gRNA 靶标
•gRNA 的得率高 (>10 ug) 且浓度高 (>200 ng/μL)

如何获得 gRNA 序列
利用 CRISPR 技术进行基因组编辑时需要使用非编码的向导 RNA (gRNA)，以便在目标靶序列上剪切基因组 DNA。gRNA 具有两个分子组件：一条靶向型 CRISPR RNA (crRNA) 和一条反式激活 crRNA (tracrRNA)，其中 crRNA (tracrRNA) 已经结合到了一个转录本中。靶序列（20个碱基）必须立即位于允许 Cas9 启动结合的 PAM 基序 (NGG) 上游。PAM 仅位于靶 DNA 上且并非靶标特定 CRISPR 序列的一部分。gRNA 和 PAM 基序引导 Cas9 核酸酶与靶向基因组序列形成复合物，并从 PAM 位点上游形成平端 DNA 双链断裂 (DSB) 的三个核苷酸。

使用我们的 CRISPR 搜索和设计工具即可在我们的数据库中搜索人和小鼠基因组中各基因专有的600,000多种 gRNA 序列。Invitrogen 预设计的 gRNA 针对基因敲除进行了优化，且通常能以每个基因的前三个转录外显子为靶标。搜索结果包括基于将潜在脱靶效应降至最低、潜在结合位点以及 gRNA 位置外显子图谱的建议。此工具也可用于分析任意目标序列以设计出独特的 CRISPR 序列。

如何构建 gRNA
选择 gRNA 序列之后，请从三种构建 gRNA 的方案中进行选择：
1.TrueGuide 合成向导 RNA—从我们的预设计的 gRNA 目录中进行选择，或者将您的序列上传到我们的 TrueGuide gRNA 订购工具
2. Precision gRNA 合成试剂盒（本页）—短短四小时内即可构建出可直接转染的 gRNA（包括模板组装）
3. 基因组工程服务—省时省力，我们的定制服务团队将为您设计、合成并纯化体外转录 (IVT) gRNA 序列。如需获取服务报价或进行订购，请联系我们的定制服务部门，电话：1-800-955-6288 转 45682，邮箱：gemservices@thermofisher.com。