EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-脱硫生物素，No-Weigh™ 规格

Thermo Scientific EZ-Link Sulfo-NHS-LC-脱硫生物素是一种长链、胺反应性标记试剂，其生物素样基团可从链霉素亲和素中洗脱，使其适用于纯化或细胞表面蛋白标记和纯化。

EZ-Link Sulfo-NHS-LC-脱硫生物素的特点：

•脱硫生物素—生物素类似物可以很容易地从链霉素亲和素中洗脱，这是亲和纯化应用的理想特点
•蛋白标记—在纯化或混合样品中标记抗体或蛋白，以便在用链霉素亲和素微珠的沉降检测中实现高回收率
•细胞表面标记—带负电荷的试剂不会渗透细胞膜，因此仅对全细胞的表面蛋白进行修饰
•胺反应性—与伯胺 (-NH2)（如赖氨酸侧链或多肽的氨基末端）发生反应
•可溶性—与普通 NHS 酯化合物相比带电荷的 sulfo-NHS 基团可提高试剂的水溶性

Sulfo-NHS-LC-脱硫生物素是生物素的一种变体，其被活化为具有长链 (LC) 间隔臂的 sulfo-NHS 酯，以通过脱硫生物素基团共价标记蛋白或其他分子的伯胺 (-NH2)。脱硫生物素标签与链霉素亲和素和其他生物素结合蛋白结合，具有高特异性但容易在温和的条件下洗脱（即，方式为被常规的游离生物素竞争性置换）。因此，该试剂是用于亲和素-生物素技术的 Sulfo-NHS-LC-生物素（产品编号 21335）的一种有用替代品，在该技术中需要对标记蛋白进行非变性洗脱。带负电荷的 Sulfo-NHS 基团防止该试剂穿透细胞膜；因此，Sulfo-NHS-LC-脱硫生物素可用于限制标记完整细胞的细胞表面蛋白。No-Weigh 规格（5 x 1 mg 可重复密封样品瓶）消除了称取少量试剂的困难，并尽可能地保护未使用的试剂不发生水解。

脱硫生物素与生物素的对比
脱硫生物素是一种单环、无硫的生物素类似物，与链霉素亲和素结合的特异性与生物素几乎相同，但亲和力低于生物素（1/Kd 分别为 10¹¹ M 和 10¹⁵ M）。因此，基于与游离生物素的竞争性置换，可以使用温和的条件，从链霉素亲和素亲和树脂中很容易且具有特异性地将脱硫生物素化诱饵蛋白及其相互作用配偶体洗脱出来。对于使用生物样品进行的沉降检测实验，脱硫生物素的这种软释放特点也有助于尽可能减少内源性生物素化分子的共纯化，在洗脱靶蛋白复合物与游离生物素时这些分子仍与链霉素亲和素结合。通过经修饰亲和素-生物素亲和系统，也无需使用可能分离复合物和/或破坏靶蛋白或细胞的苛刻洗脱条件。脱硫生物素技术是使用不表达融合标签的天然或重组蛋白或在天然条件下分离捕获蛋白的理想选择，例如靶向完整细胞或细胞表面蛋白时。

使用 NHS 酯试剂进行标记
生物素的 N-羟基磺基琥珀酰亚胺 (NHS) 酯是最常用的生物素化试剂。NHS-活化生物素在碱性缓冲液中与伯胺基 (-NH2) 高效反应，形成稳定的酰胺键。蛋白质通常有几个可作为标记靶标的伯胺，包括赖氨酸 (K) 残基的侧链和每个多肽的 N 端。大多数 sulfo-NHS 酯具有直接水溶性，但不具有膜可透过性。原色普通 NHS 酯在水性缓冲液中的溶解性较低，但具有膜可透过性。