Pierce™ 细胞表面生物素化和分离试剂盒

Thermo Scientific Pierce 细胞表面蛋白生物素化和分离试剂盒能实现质膜蛋白的选择性生物素化、增溶和富集。

细胞表面蛋白生物素化和分离试剂盒的特点包括：
•提高性能—试剂盒和方案经过重新设计，可提高生物素化质膜蛋白的富集和提取效率，同时较大程度减少细胞内蛋白污染
•优化—方案已被刷新，从而缩短了处理时间和步骤数，试剂配方经过优化，可提高性能
•兼容性—已使用悬浮和贴壁细胞系对试剂进行验证，并提供了 MS 样品制备的其他说明
•经验证应用—试剂和程序与 Western 印迹和 MS 应用兼容

该易于使用的试剂盒提供了实现细胞表面蛋白的理想标记和后续分离的所有必要组分和程序。缓冲液预先配制，可生成一致的结果。哺乳动物细胞首先用 EZ-Link Sulfo-NHS-SS-生物素（是一种硫醇可裂解的胺反应性生物素化试剂）标记。细胞随后被裂解并用 NeutrAvidin 琼脂糖捕获标记的蛋白。二硫苏糖醇 (DTT) 用于洗脱以还原生物素标记中的二硫键，从而释放不带生物素标记的结合蛋白。本试剂盒包含足够进行 8 次实验的试剂，由 2 个 85-95% 汇合的 15 cm 培养皿或 4 个 75 cm² 烧瓶组成。

细胞表面蛋白代表细胞蛋白的重要子集并在信号转导、细胞粘附、离子转运中起着重要作用。这些蛋白具有多个跨膜结构域，因此难以高效提取和分离。高效提取所需的严苛去污剂和条件通常会在分离后导致质膜蛋白的变性和污染。作为备选方案，该试剂盒利用膜不可透过性、胺反应性 sulfo-NHS-SS-生物素高效标记具有可获取赖氨酸的细胞表面蛋白。裂解、捕获、洗涤和洗脱条件已经过优化，可实现高效富集和分离，同时尽可能减少细胞内蛋白的污染。

此方案已针对多种哺乳动物细胞系（包括贴壁和悬浮细胞）进行了优化，适用于处理细胞和未处理细胞之间或一个或多个细胞系之间的差异表达分析。细胞表面蛋白分离的选择性和有效性已通过 Western 印迹和 LC-MS 分析验证。