质谱兼容交联剂

化学交联结合质谱分析是改善蛋白表征及鉴别蛋白间相互作用的高效方法。该方法已应用于重组和天然蛋白复合物，最近已应用于全细胞裂解物或完整的单细胞生物，以在总体范围内鉴别蛋白-蛋白相互作用。DSPP 和 TBDSPP 的富集功能通过分离交联肽与非交联肽来降低样品复杂性，从而改善交联蛋白的检测。

• 三效交联剂：间隔区中用于富集的 NHS 酯（两端）、膦酸 (DSPP) 或膦酸酯 (TBDSPP)
• 用于蛋白结构和相互作用表征的高纯度晶体试剂
• 用于细胞内交联的可透过膜版本 (TBDSPP)
• 可使用 Fe-NTA IMAC 或 TiO₂ MOAC 富集

DSPP（二琥珀酰亚胺基膦酸，PhoX）和 TBDSPP（叔丁基二琥珀酰亚胺膦酸盐，tBu-PhoX）是可富集膦酸的交联剂，在7原子间隔臂的各端含有胺反应性 N-羟基琥珀酰亚胺 (NHS) 酯，且具有用于富集的膦酸基团 (DSPP) 或膦酸酯 (TBDSPP)。两者均可在 pH 值为 7–9 的缓冲液中与伯胺基团 (-NH2) 高效反应，以形成稳定的酰胺键。然后，可使用膦酸或膦酸酯基团通过固定化金属亲和色谱分析 (IMAC) 或金属氧化物亲和色谱分析 (MOAC) 富集交联肽。

在两种可富集的 MS 交联剂中，DSPP 比 TBDSPP 更易溶于水，且更适用于体外交联、简单的纯化蛋白和蛋白复合物。由于膜透性较高，TBDSPP 更适合细胞内交联。虽然两种交联剂均可使用传统磷酸肽方法富集，但 TBDSPP 交联肽必须先使用 TFA 培养以去除叔丁基保护基团。TBDSPP 膦酸基团（酸裂解后）不是磷酸酶的底物，它可在富集前去除样品中的内源性磷酸肽。

注：要对交联肽进行高分辨率分析，建议对 Nanospray Flex 源使用 Acclaim PepMap 100 C18 LC 色谱柱（货号 164940 或 164568）。对于 EASY-Spray 离子源，推荐 LC 色谱柱为 EASY-Spray C18 LC 色谱柱（货号 ES900 或 ES904）。