Invitrogen TrueTag 供体 DNA 试剂盒 (GFP Stem) 提供了一种快速解决方案,用于驱动转染即用型供体 DNA 进行高效的沉默或差异表达基因标记(高达 100% 的编辑后细胞)。
TrueTag 供体 DNA stem 试剂盒的优势包括:
• 通过一步法 PCR 扩增生成供体模板—无需克隆
• 转染即用型 DNA 供体仅需几小时即可生成,无需数天
• 与单细胞分离和表征相比,可节省长达3个月的富集时间
• 富集多达 100% 的 GFP 标记细胞
TrueTag 供体 DNA 试剂盒 (GFP Stem) 提供了生成高质量 DNA 供体以使用选择标记物和 GFP 标记基因所需的一切—只需提供两个位点特异性引物,即可为供体添加同源臂并进行 PCR 扩增。各试剂盒的设计目的在于使您可以进行以下操作:
• 富集已标记的细胞,即使在未表达靶蛋白时亦然
• 选择融合或共表达荧光标记
• 挑选嘌呤霉素或杀稻瘟菌素选择标记物—选择最适合细胞模型的标记物
• 细胞富集后,使用 Cre/Lox 轻松去除抗生素抗性标记物
试剂盒内含物 • 四个线性供体模板:C 端/嘌呤霉素抗性 + 2A、C 端/杀稻瘟菌素抗性 + 2A、C 端/嘌呤霉素抗性、C 端/杀稻瘟菌素抗性
• Phusion 快速高保真 PCR 预混液
• PCR 纯化柱和缓冲液
• 用于标记人胶质纤维酸性蛋白 (
GFAP) 的阳性对照引物
用于快速设计基因特异性试剂的 TrueDesign Genome Editor 软件 正确敲入荧光标记需要靶标特异性基因编辑试剂。确定您感兴趣的靶基因转录本,基于网络的
TrueDesign Genome Editor 软件会为您完成以下工作:
1.显示您的靶基因转录本
2.指定您的插入位点
3.设计并帮助轻松订购 TrueTag 试剂盒中未包含的所有必要组分:
• CRISPR 向导 RNA 或 TALEN,设计为靠近 N 端或 C 端
• 寡核苷酸,用于对供体进行 PCR 扩增并添加适当的同源臂
• 测序引物,用于评估 CRISPR-Cas9 切割效率
• 验证引物,用于验证 TrueTag DNA 供体是否正确插入
其他需要使用并可单独购买或作为 TrueDesign 工作流程的一部分提供的组分:
•
TrueCut Cas9 蛋白 v2、
TrueCut HiFi Cas9 蛋白或
GeneArt CRISPR mRNA •
CRISPRMAX 转染试剂或
MessengerMAX 转染试剂