RecoverAll™ FFPE 总核酸分离试剂盒
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RecoverAll™ FFPE 总核酸分离试剂盒

RecoverAll™ FFPE 总核酸分离试剂盒用于从福尔马林或多聚福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 组织中提取总核酸。包括足够用于从多达四张 20 µm 切片或多达了解更多信息
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AM197540 次制备
货号 AM1975
价格(CNY)
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Ends: 31-Dec-2025
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RecoverAll™ FFPE 总核酸分离试剂盒用于从福尔马林或多聚福尔马林固定、石蜡包埋 (FFPE) 组织中提取总核酸。包括足够用于从多达四张 20 µm 切片或多达 35 mg 未切片的核心样品各进行40次纯化的试剂。用于 FFPE 的 RecoverAll™ 总核酸分离试剂盒的特性:

•针对从 FFPE 组织中分离总核酸(包括 microRNA)进行了优化
• 无需过夜蛋白酶 K 消化 — 早上脱蜡,下午进行 qRT-PCR
• 典型得率 > 未固定组织的 50%
• 回收的核酸适用于下一代测序、实时 RT-PCR、PCR、突变筛选和微阵列分析

从不同的样品中提取核酸
存档的组织样品包含有价值的疾病状态信息,但传统上很难将核酸从质量适用于分子分析的样品中分离出来。标准保存技术使用福尔马林,可保持组织结构并防止易腐败,但也可捕获核酸并通过蛋白质-蛋白质和蛋白质-核酸交联修饰。RNA(在一定程度上是 DNA)通常经过这种片段化和化学修饰,因此与许多分子分析技术不兼容。FFPE 组织中的 RNA 片段化无法逆转;然而,RecoverAll™ 试剂盒的蛋白酶消化条件设计用于在相对较短的时间内释放较大量(如图所示)的所有大小的捕获 RNA 片段,包括 microRNA。

RecoverAll™ 总核酸分离试剂盒溶液
RecoverAll™ 总核酸分离试剂盒操作需要约45分钟的手动操作时间,并且通常可以在不到1天的时间内完成针对 RNA 的操作。使用一系列二甲苯和乙醇洗涤液对 FFPE 样品进行脱蜡。接下来,它们要经过大量的蛋白酶酶切,孵育时间应符合 RNA 或 DNA 回收的要求。然后使用快速玻璃过滤法纯化核酸,并洗脱至水或低盐缓冲液中。

几乎用于任何下游应用的核酸
对于所有 FFPE 组织都是这样,样品固定和储存通常会导致核酸片段化和修饰。因此,下游应用(如微阵列分析,需要比 qRT-PCR 更原始的 RNA)可能需要进行修饰以获得较优结果。尽管 DNA 一般不和 RNA 一样容易进行片段化,但它与福尔马林反应更强,而且需要更长的(2天)蛋白酶消化时间来释放大量 DNA。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
洗脱体积60 μL
最终产品类型基因组 DNA、总 RNA、micro RNA
适用于(应用)下一代测序、实时荧光定量 PCR (qPCR)、逆转录酶 PCR (RT-PCR)、microRNA 分析、Southern 印迹、Northern 印迹、PCR、cDNA 文库构建
高通量能力不兼容高通量应用(手动)
纯化时间45 min。
数量40 次制备
运输条件Box 1: Room Temperature
Box 2: Dry Ice
原始材料量多达 35 mg 未切片核心样品,多达 4 个 20 μm 切片
产量24 μg
分离技术离心柱(玻璃纤维滤器)
样品类型FFPE 与固定样品, Paraffin-embedded (FFPE) Tissue
Unit SizeEach
内容与储存
• 16 ml 酶切缓冲液(室温)
• 60 ml 洗涤 1 浓缩液(室温)
• 60 ml 洗涤 2/3 浓缩液(室温)
• 80 个收集管(室温)
• 40个滤芯(室温)
• 19.2 ml 分离添加剂(室温)
• 5 ml 洗脱溶液(-20°C、4°C 或室温)
• 160 μl 蛋白酶 (-20°C)
• 240 μl 10X DNase 缓冲液 (-20°C)
• 160 μl DNase (-20°C)
• 400 μl RNase A (-20°C)

本试剂盒分成两部分进行运输:一部分在室温下,一部分在 -20°C 下。

常见问题解答 (FAQ)

我想从福尔马林固定的样本和非固定的激光捕获显微切割(LCM)样本提取miRNA,哪个试剂盒最合适?

对于福尔马林固定样本,我们推荐使用RecoverAllFFPE样品总核酸分离试剂盒。您可以使用此试剂盒从FFPE样品中提取总RNA和miRNA,然后按照miRVana试剂盒说明中的富集方案对上述样本内的miRNA进行富集。对于未固定的LCM样品,您可以使用RNAqueous试剂盒。

从FFPE样本提取DNA,如何才能保证DNA的质量和得率?

许多因素都可能影响从FFPE组织提取的DNA的总体质量和得率。以下为我们就如何解决这些关键影响因素而提出的一些建议:

1.组织获取和样本制备 - 在条件允许的情况下,组织应在外科切除下来后一小时内固定。使用中性福尔马林或多聚甲醛缓冲液固定的最佳时长为12-24小时。固定后的组织进入包埋程序之前,应彻底脱水。
2.组织块的储存 -在条件允许的情况下,储存的组织块尽量保证无切面。如果出现切面,氧气、水、光、以及外源感染(如真菌、昆虫等)等其他环境因素可能会造成组织块的进一步破坏。
3.用于DNA分离的组织类型、大小和数量 – 建议的组织厚度为10-20 µm。所用的切片数量取决于组织类型(决定细胞密度)和表面积大小(推荐大小:50-300 mm2)。过量的起始材料可能导致过滤柱堵塞,导致得率下降。
4.包埋组织时的过量石蜡 - 在条件允许的情况下,在纯化操作之前脱去组织样本上过多的石蜡。对于二甲苯纯化法而言,室温条件下的两次二甲苯处理通常能够彻底脱石蜡。必要情况下,可在更为强效的37–55°C条件下处理达30分钟。在二甲苯脱蜡操作完成后,须对沉淀物进行两次100%乙醇漂洗,再彻底去除100%乙醇。磁珠法采用全新的化学方法来处理石蜡,所选用的组织切片应在20 µm以内。

请点击此处(https://www.thermofisher.com/us/en/home/references/ambion-tech-support/rna-isolation/general-articles/extraction-of-nucleic-acids-from-ffpe-samples.html)阅读更多关于FFPE样本核酸提取的信息。

哪款产品可以用来提取FFPE(福尔马林固定,石蜡包埋)样本中的DNA?

我们为此提供了两种试剂盒:用于FFPE组织的RecoverAll总核酸分离试剂盒和MagMAX FFPE DNA/RNA Ultra试剂盒。请点击此处(http://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/dna-rna-purification-analysis/dna-extraction/genomic-dna-extraction/dna-extractions-working-with-ffpe-samples.html)了解更多关于这些试剂盒的差异。

I want to isolate miRNA from formalin-fixed and unfixed laser capture microdissection (LCM) samples. Which kit will be best for this?

For recovery of miRNA of formalin-fixed samples, we recommend using RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Kit for FFPE. You can isolate total and miRNA using the RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Kit for FFPE, then use that prep for enrichment of miRNA using the enrichment protocol described in the instructions for the mirVana kit. For unfixed LCM samples, you could use an RNAqueous kit.

How can I increase my chances of successful extraction of FFPE samples in terms of DNA quality and yield?

There are a number of factors that can impact the overall quality and yield of DNA isolated from FFPE tissues. Here are recommendations to address several key factors:

- Upstream tissue procurement and tissue specimen preparation - if possible, tissues should be fixed within one hour of surgical resection. The optimal fixation time is 12-24 hours using neutral-buffered formalin or paraformaldehyde. Fixed tissues should be thoroughly dehydrated prior to the embedding process.
- Block storage - storage of blocks without cut faces, when possible, prevents ongoing damage from exposure to atmospheric oxygen, water, and other environmental factors such as light and infestation (fungi, insects, etc.).
- Tissue type, size, and amount being used for DNA isolation - the recommended tissue thickness is 10-20 µm. The number of sections used is determined by the tissue type (which impacts cell density) and surface area (recommended size: 50-300 mm^2). Excess starting material can cause filter clogging, resulting in poor yield.
- Excessive amount of paraffin used for embedding tissues - when possible, excess paraffin should be trimmed away prior to starting the purification protocol. For xylene-based purification methods, two xylene treatments at room temperature should be sufficient for complete deparaffinization. If desired, a more rigorous 37-55 degrees C treatment can be performed for up to 30 minutes. After the xylene deparaffinization, it is crucial that the 100% ethanol is completely removed and the pellets are dry after the two 100% ethanol washes. The magnetic bead method employs novel chemistries to deal with the paraffin that limits input to 20 µm sections.

Read more about extraction of nucleic acids from FFPE samples here (http://www.thermofisher.com/us/en/home/references/Invitrogen-tech-support/rna-isolation/general-articles/extraction-of-nucleic-acids-from-ffpe-samples.html).