我们同时推荐您以High Five和Sf9这两类细胞来小规模尝试蛋白转染生产实验。通常每毫升的Sf9细胞培养物所生成的蛋白产物稍多,因为它们可于3–4 x 10E6个细胞/mL的密度下完成转染。High Five在大于2 x 10E6个细胞/mL的密度下就已完全进入对数生长期,因此它们不宜在高于2 x 10E6个细胞/mL的密度下进行转染。
昆虫细胞远比许多哺乳动物细胞系更为脆弱。这些细胞在过度生长和过度分离之后,会比哺乳动物细胞出现更多损伤。在悬浮培养时一定不要让细胞密度超过8 x 10E6细胞/mL或以低于0.5 x 10E6个细胞/mL的密度下生长。昆虫细胞需要略高于哺乳动物细胞的渗透压条件(340 μOsM)。昆虫细胞需要大量的O2,特别是在蛋白表达阶段。昆虫细胞培养基比哺乳动物培养基要酸得多(pH6.0-6.4)。昆虫细胞培养基是基于磷酸缓冲体系的。因此,无需使用CO2来维持pH值。