Click-iT™ TUNEL 比色 IHC 检测试剂盒

可以，额外的末端脱氧核苷酸转移酶（rTdT）可以购买。货号为10533-065或10533-075。额外的TdT反应缓冲液可以购买，货号为16314-015。

我们没有在3D培养体系中使用过EdU TUNEL检测调亡，但是因为这种试剂适用于体内细胞标记，所以它也有希望可以标记3D培养体系中的细胞。文献中有大量关于在3D培养体系中使用这种产品报道；此处有一些引证：

Lei Y, Schaffer DV (2013) A fully defined and scalable 3D culture system for human pluripotent stem cell expansion and differentiation.Proc Natl Acad Sci U S A 110:E5039–E5048.
Derda R, Laromaine A, Mammoto A et al.(2009) Paper-supported 3D cell culture for tissue-based bioassays.Proc Natl Acad Sci U S A 106:18457–18462.
Robertson FM, Ogasawara MA, Ye Z et al.(2010) Imaging and Analysis of 3D Tumor Spheroids Enriched for a Cancer Stem Cell Phenotype.J Biomol Screen 15:820–829.

大部分组织样品需要充分消化15分钟。最佳的培养时间根据组织类型和厚度而不同。我们已经观测到脑组织比其他组织需要更长的蛋白酶处理时间。 

我们在5–20 µM 厚度的老鼠肠、肾脏、肝脏、心脏和结肠FFPE切片中验证了Click-iT Plus TUNEL for In Situ Apoptosis Detection实验

初代Click-iT TUNEL实验试剂盒针对细胞培养样品优化，也可用于组织样品。我们建议对组织样品使用Click-iT Plus TUNEL for In Situ Apoptosis Detection实验试剂盒；用于组织的Click-iT Plus TUNEL for In Situ Apoptosis Detection实验试剂盒的实验方案针对组织样本优化。通过改进方案可以提高TdT酶进入多层细胞组织样品的效果。另外，相比于Click-iT Plus TUNEL试剂盒，我们发现初代Click-iT TUNEL试剂盒可能会在组织样品出现高度非特异性结合和点状染色。有一个增加组织透过性较好的方法是用蛋白酶K消化然后甲醛中再固定样品以取代去污剂透化作用步骤。Click-iT Plus TUNEL试剂盒手册第三部分的组织固定和透化作用方案可用于初代Click-iT TUNEL实验处理组织样品。胃蛋白酶和其他的蛋白水解酶同时也可用于提高组织透过性。