ChromaTide™ Alexa Fluor™ 594-5-dUTP
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引用和文献 (7)
Invitrogen™

ChromaTide™ Alexa Fluor™ 594-5-dUTP

Molecular Probes™ ChromaTide™ 染料标记 dUTP、OBEA-dCTP 和 UTP 核苷酸可用于合成标记的 DNA了解更多信息
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Molecular Probes™ ChromaTide™ 染料标记 dUTP、OBEA-dCTP 和 UTP 核苷酸可用于合成标记的 DNA 探针，而无需使用危险而昂贵的放射性同位素标记的核苷酸。这些核苷酸可采用标准分子生物学技术掺入，然后可以在原位杂交、微阵列或印迹方案中使用标记探针。ChromaTide™ 染料标记核苷酸可提供不同的荧光颜色，以方便进行多色分析。

ChromaTide™ 标记核苷酸规格：
• 染料的 Ex/Em：Alexa Fluor™ 594-5-dUTP (590/615 nm)
• 炔基氨基连接子的长度：5 个原子

将 ChromaTide™ 核苷酸掺入探针的方法
• 切口平移
• 随机引物标记
• 末端脱氧核苷转移酶的末端标记
• 逆转录
• PCR 扩增

参见酶促掺入 ChromaTide™ dUTP 的方法了解其中每个方法的特定指南。

Alexa Fluor™ 和 BODIPY™ 荧光染料可制备优质探针
使用标记核苷酸制备的探针可以用于多色技术，如原位杂交和阵列杂交。我们专有的 BODIPY™ 和 Alexa Fluor™ 染料偶联物非常明亮、具有光稳定性且对 pH 几乎不敏感。BODIPY™ 染料的窄发射谱有助于确保极小的光谱重叠。Alexa Fluor™ 染料水溶性高，由此制备的 DNA 探针也一样，使其成为荧光原位杂交的首选标记。

长连接子可以提高性能
通过独特的炔基氨基连接体在尿苷的 C-5 位点处的 ChromaTide™ dUTP 和 UTP 核苷酸进行修饰，这可以在核苷酸与染料之间提供间隔，减少两者之间的相互作用。产品名称中的数字，例如荧光素-12-dUTP 中的 “12”，表示原子中间隔的净长度。这些间隔可产生更明亮的偶联物，并且提高二级检测试剂的半抗原可及性。

关于 ChromaTide™ 试剂的完整列表：Molecular Probes ChromaTide™ 和 aha 标记核苷酸—表 8.5。
有关这些标记试剂的更多信息，请阅读 Molecular™ Probes 手册中的标记寡核苷酸与核酸—第 8.2 节。

仅供科研使用。不得用于人或动物的治疗或诊断用途。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
标记方法直接标记
标签或染料Alexa Fluor™ 594
数量25 μL
运输条件干冰
最大浓度1 mM
产品线Alexa Fluor、ChromaTide, ChromaTide
Unit SizeEach
内容与储存
储存在冰箱(-5 至 -30°C)中并避光。

常见问题解答 (FAQ)

使用ChromaTide核苷酸标记后的背景很高。你们有什么建议吗？

你可以尝试使用合适的基于离心柱的方法纯化ChromaTide标记的探针以去除未掺入的ChromaTide核苷酸。乙醇沉淀可能不能有效的去除未掺入的ChromaTide核苷酸，因此需要使用离心柱进行纯化。

使用ChromaTide核苷酸标记后的核酸探针没有荧光。你们有什么建议吗？

•检查碱基和染料的比例，确定ChromaTide核苷酸掺入水平。由于荧光检测可能受标记不足、过度标记、仪器灵敏度或其它因素影响，所以碱基与染料的比例是更好的检测掺入效率的指标。
•ChromaTide核苷酸在酶促标记反应时可能没有很好的掺入。确保所使用的酶促方法与特定的荧光ChromaTide核苷酸兼容，因为一些方法可能并不是对所有应用都适合。您可能还需要进一步优化酶促掺入方法，如优化酶浓度、孵育时间、浓度及标记核苷酸与未标记核苷酸的比例。对于PCR，保真度低一些的聚合酶可以得到更高的掺入率；当然，使用PCR时，掺入率通常都较低。
•检查检测所用荧光滤光片，确保其与染料相兼容。你也可以在所用滤光片下检测一小滴没有稀释的染料，确保在没有与寡核苷酸结合前你能对染料单独成像。Alexa Fluor 647的发射荧光肉眼不可见，因此需要远红外成像系统进行检测。

ChromaTide核苷酸可以用于在活细胞内标记核酸吗？

不能，它们不是细胞通透的所以它们仅适用于体外掺入方法。荧光染料和磷酸基团电荷太高因而不能穿透完整细胞膜。不带磷酸基团的非荧光染料例如EdU, EU, 或BrdU可以用于活细胞核酸掺入研究。

使用酶促掺入方法时，我如何才能确定ChromaTide标记核苷酸的掺入效率？

碱基-染料比例可以通过测定核酸在260 nm的吸光值和染料在其最大吸收峰的吸光值而确定。使用相应染料和核酸的消光系数，您就可以通过Beer-Lambert定律计算出被标记核酸的碱基-染料比例。详细的说明可以在下列产品说明中找到：

酶促方法掺入ChromaTide dUTP (http://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/td07604.pdf)
酶促方法掺入ChromaTide UTP(http://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/td07605.pdf).

使用酶促法掺入ChromaTide核苷酸时的平均掺入率是多少？

平均掺入率是大约每100-150碱基掺入一个染料分子，所以ChromaTide荧光标记核苷酸通常是我们提供的核酸标记方法里标记率最低的。

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引用和文献 (7)

引用和文献
Abstract
Visualization of the intracellular behavior of HIV in living cells.
Authors:McDonald D, Vodicka MA, Lucero G, Svitkina TM, Borisy GG, Emerman M, Hope TJ
Journal:J Cell Biol
PubMed ID:12417576
'To track the behavior of human immunodeficiency virus (HIV)-1 in the cytoplasm of infected cells, we have tagged virions by incorporation of HIV Vpr fused to the GFP. Observation of the GFP-labeled particles in living cells revealed that they moved in curvilinear paths in the cytoplasm and accumulated in the ... More
Postreplicative mismatch repair factors are recruited to Epstein-Barr virus replication compartments.
Authors:Daikoku T, Kudoh A, Sugaya Y, Iwahori S, Shirata N, Isomura H, Tsurumi T
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16510450
'The mismatch repair (MMR) system, highly conserved throughout evolution, corrects nucleotide mispairing that arise during cellular DNA replication. We report here that proliferating cell nuclear antigen (PCNA), the clamp loader complex (RF-C), and a series of MMR proteins like MSH-2, MSH-6, MLH1, and hPSM2 can be assembled to Epstein-Barr virus ... More
Expression of C-terminal deleted p53 isoforms in neuroblastoma.
Authors:Goldschneider D, Horvilleur E, Plassa LF, Guillaud-Bataille M, Million K, Wittmer-Dupret E, Danglot G, de Thé H, Bénard J, May E, Douc-Rasy S
Journal:Nucleic Acids Res
PubMed ID:17028100
'The tumor suppressor gene, p53, is rarely mutated in neuroblastomas (NB) at the time of diagnosis, but its dysfunction could result from a nonfunctional conformation or cytoplasmic sequestration of the wild-type p53 protein. However, p53 mutation, when it occurs, is found in NB tumors with drug resistance acquired over the ... More
The genetic architecture of Down syndrome phenotypes revealed by high-resolution analysis of human segmental trisomies.
Authors:Korbel JO, Tirosh-Wagner T, Urban AE, Chen XN, Kasowski M, Dai L, Grubert F, Erdman C, Gao MC, Lange K, Sobel EM, Barlow GM, Aylsworth AS, Carpenter NJ, Clark RD, Cohen MY, Doran E, Falik-Zaccai T, Lewin SO, Lott IT, McGillivray BC, Moeschler JB, Pettenati MJ, Pueschel SM, Rao KW, Shaffer LG, Shohat M, Van Riper AJ, Warburton D, Weissman S, Gerstein MB, Snyder M, Korenberg JR,
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:19597142
'Down syndrome (DS), or trisomy 21, is a common disorder associated with several complex clinical phenotypes. Although several hypotheses have been put forward, it is unclear as to whether particular gene loci on chromosome 21 (HSA21) are sufficient to cause DS and its associated features. Here we present a high-resolution ... More
Mapping of genomic clones by fluorescence in situ hybridization.
Authors:Leversha MA
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:11462829
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