EZ-Link™ DBCO 蛋白标记试剂盒

EZ-Link DBCO 蛋白标记试剂盒提供了与二苄基环辛炔 (DBCO) 基团共价标记蛋白用于无铜点击化学应用所需的所有试剂。该试剂盒含有用于进行 5 次标记反应和后续纯化以除去过量 DBCO 试剂的必要材料。该试剂盒中提供的 TFP-PEG4-DBCO 易于与蛋白上发现的伯胺反应，形成共价连接的 DBCO 基团，该基团可进一步与叠氮化物标记的偶联配偶体（单独提供）反应，以产生多种生物偶联物。

EZ-Link DBCO 蛋白标记试剂盒的特点包括：
•通用—可标记 0.5–5 mL 体积的蛋白 (20–150 kDa)
• 化学选择性—DBCO 可选择性与叠氮化物发生反应
• 异型双功能—可与胺和叠氮化物发生反应
• 稳定—TFP 酯比 NHS 酯水解更稳定，可减少试剂用量
• 便利—标记和纯化只需 90 分钟即可完成，手动操作时间为 30 min

该试剂盒中提供的 TFP-PEG4-DBCO 是一种异型双功能交联剂，其包含胺反应性四氟苯基 (TFP) 基团和叠氮化物反应性二苄基环辛炔 (DBCO) 基团，在两个基团之间具有水溶性 PEG4 间隔区。在第一个偶联步骤中，TFP 基团与蛋白上的伯胺反应以形成稳定的酰胺键和共价结合的 DBCO 部分。后续纯化可去除溶液中可能干扰第二个标记步骤的过量交联剂。一旦蛋白被 DBCO 标记且纯化，其即会发生无铜菌株促进的叠氮化物-炔烃环加成反应 (SPAAC)，以与叠氮化物标记的偶联配偶体（单独提供）形成稳定的三唑键，以产生多种生物偶联物。

二苄基环辛炔 (DBCO) 和叠氮化物是生物正交偶联配偶体，因为其可在生物系统中发生反应，而不会干扰正常的生化过程，因此在细胞或裂解物中发现的大分子的脱靶标记极少。DBCO 和叠氮化物之间的反应可用于多种应用，包括创建蛋白-蛋白、蛋白-生物分子或蛋白-小分子偶联物。
经典的点击反应包括铜催化的叠氮化物-炔烃环­加成，以标记或偶联分子。这种方法的缺点是铜离子会损害蛋白功能，损害细胞，并减少荧光基团的荧光。DBCO 的独特之处在于它不需要铜来催化与叠氮化物的反应以形成三唑。八元环形式的菌株允许在没有催化剂的情况下与叠氮化物修饰的分子发生反应，从而防止铜诱导的对细胞或蛋白的损伤。