Thermo Scientific aLICator™ LIC 克隆和表达系统设计用于在大肠杆菌中快速且高效地连接独立克隆并严格调控基因表达。pLATE 细菌表达载体设计可实现极轻微背景（未诱导）表达的同时具有高水平靶蛋白表达，允许表达对大肠杆菌细胞有毒性的蛋白。为了简化并促进将克隆插入表达载体的过程，aLICator 系统使用定向 LIC 克隆技术（一种能够提供高克隆效率的快速程序）。

aLICator LIC 克隆和表达系统的严格调控表达和快速高效的定向克隆使其成为大肠杆菌常规和毒性基因克隆和表达的极佳选择。

产品优势

• 高效 LIC 克隆
• 严格控制基因表达
• 高得率表达
• 通用—具有标签去除选项的带标签或不带标签蛋白表达

应用

• 定向 PCR 产物克隆
• 严格调控蛋白表达
• 毒性基因的表达

原则

aLICator LIC 克隆系统使用定向 LIC 克隆技术简化和促进克隆至表达载体。LIC 可确保超过 95% 的高克隆效率，并且无需连接和限制性内切酶酶切步骤。

LIC 方法使用 T4 DNA 聚合酶在 pLATE 载体和 DNA 插入片段上创建特异性的 14 至 21 个核苷酸单链突出端。T4 DNA 聚合酶具有两种酶活性：5'→3' 聚合酶活性和 3'→5' 核酸外切酶活性。核酸外切酶活性可从 DNA 的 3'末端去除核苷酸，而聚合酶活性可使用 dNTP 和互补 DNA 链作为模板来恢复链。在 LIC 方案中，反应中仅包括 dGTP，使得互补链中首次出现胞嘧啶时 3'→5'-核酸外切酶和 5'→3'-聚合酶活性可平衡。退火后，无需使用 T4 DNA 连接酶即可将 LIC 载体和插入片段转化为感受态大肠杆菌细胞。在载体-插入片段连接处形成共价键，在细胞内产生环状质粒。

特点

系统由四个基于 pLATE 系列细菌表达载体的试剂盒组成：

•aLICator™ LIC 克隆和表达试剂盒 1 - pLATE11 载体，不带标签蛋白表达。
•aLICator™ LIC 克隆和表达试剂盒 2（N 端 His 标签/EK）—pLATE51 载体，N 端 His 标签蛋白表达。
•aLICator™ LIC 克隆和表达试剂盒 3（C 端 His 标签）—pLATE31 载体，C 端 His 标签蛋白表达。
•aLICator™ LIC 克隆和表达试剂盒 4（N 端 His 标签/WQ）—pLATE 52 载体，N 端 His 标签蛋白表达、WELQut 切割的选择。
•aLICator™ LIC 克隆和表达套装 1（一体式/EK）—pLATE11、pLATE51 和 pLATE31 载体，不带标签、N 或 C 端 His 标签蛋白表达的选择。
•aLICator™ LIC 克隆和表达套装 2（一体式/WQ）—pLATE11、pLATE52 和 pLATE31 载体，不带标签、N 或 C 端 His 标签蛋白表达、WELQut 切割的选择。

对于已知优先针对 N 或 C 端 6xHis 标签位置的蛋白，建议使用适当的 N 或 C 端试剂盒。当尚不清楚蛋白结构和特点时，推荐克隆到所有三种载体中，并确定较兼容载体以进行进一步研究。

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