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引用和文献 (10)
Invitrogen™
EasySelect™ 毕赤酵母表达试剂盒
EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒提供酵母菌毕赤酵母中蛋白生产所需的所有组成部分。EasySelect™ 试剂盒含有毕赤酵母菌株、表达载体和能够转化毕赤酵母细胞的试剂。使用 Zeocin™ 抗生素进行选择可轻松筛选高拷贝数转化变体。毕赤酵母表达系统的优势：•使得毕赤酵母细胞的培养如同大肠杆菌一样简单•获得优于其他微生物表达系统的细胞密度。•每个细胞生成的蛋白多于其他微生物表达系统。•从真核蛋白加工了解更多信息
| 货号 | 数量 |
|---|---|
| K174001 | 1 个试剂盒 |
货号 K174001
价格（CNY)
30,489.00
Each
数量:
1 个试剂盒
价格（CNY)
30,489.00
Each
EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒提供酵母菌毕赤酵母中蛋白生产所需的所有组成部分。EasySelect™ 试剂盒含有毕赤酵母菌株、表达载体和能够转化毕赤酵母细胞的试剂。使用 Zeocin™ 抗生素进行选择可轻松筛选高拷贝数转化变体。
毕赤酵母表达系统的优势：
•使得毕赤酵母细胞的培养如同大肠杆菌一样简单
•获得优于其他微生物表达系统的细胞密度。
•每个细胞生成的蛋白多于其他微生物表达系统。
•从真核蛋白加工、蛋白折叠和翻译后修饰中受益。
•易于从摇瓶发酵扩展到工业规模的发酵。
成熟的蛋白表达系统
在过去的 30 年里，毕赤酵母被世界各地的实验室和行业用于生产许多物种（包括人）的数百种不同蛋白（参考文献 1、2、3）。毕赤酵母可像细菌（大肠杆菌）或酵母菌（酿酒酵母）一样易于生长，且可提供超出这些系统的许多优势（参考文献 4）。毕赤酵母可生长至远远高于细菌或其他酵母菌的细胞密度。毕赤酵母能够以甲醇为单一碳源进行生长，使其规模扩大至工业水平的成本相对低廉。
AOX1 启动子的作用
EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒采用来自毕赤酵母醇氧化酶 1 (AOX1) 基因的启动子来启动蛋白的生产。毕赤酵母能够以甲醇为单一碳源进行生长。以甲醇为单一碳源生长时，AOX1 mRNA 最多可占总 mRNA 的 5%，而 AOX1 酶最多可占细胞重量的 30%（参考文献 5）。
EasySelect™毕赤酵母表达系统随附 pPICZ 和 pPICZα 载体。pPICZ 和 pPICZα 载体包含一个多克隆位点 (MCS)，可在 AOX1 启动子的控制下插入您的目标基因。pPICZ 和 pPICZα 载体还含有 c-Myc 标签（便于检测）和多聚组氨酸 (6xHis) 标签（便于检测和纯化蛋白）。
由于毕赤酵母自然分泌少量蛋白，可以使用 pPICZα 载体中的细胞外信号转导序列促使目标蛋白分泌至培养基中，以简化下游纯化。
获得整合 Zeocin™ 抗生素的高拷贝数
EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒采用 Zeocin™ 抗生素选择转化的毕赤酵母细胞。pPICZ 和 pPICZα 载体含有来自印度斯坦链异壁菌 (Sh ble) 的博来霉素基因，可获得对 Zeocin™ 抗生素的耐药性。pPICZ 和 pPICZα 载体可稳定整合至毕赤酵母基因组中。通过增加 Zeocin™ 抗生素的浓度，您可以轻松选择具有较高整合数量和较高蛋白表达水平的克隆。
EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒包含以下组成部分：
•毕赤酵母和大肠杆菌拭子瓶菌株，用于启动培养。
•用于制备可转化的毕赤酵母细胞的溶液。
•用于将目标基因与 AOX1 启动子融合的 pPICZ 和 pPICZα 载体。
•用于确认基因已插入 pPICZ 载体的测序引物。
•用于选择转化的毕赤酵母细胞的 Zeocin™ 抗生素。
仅供研究使用。不适用于诊断程序。
相关链接
•查看 pPICZ A、B、C 载体的产品插页 (PDF)。
•查看 pPICZα A、B、C 载体的产品插页 (PDF)。
•查看 Zeocin™ 抗生素的产品插页 (PDF)。
•查看 Invitrogen 提供的毕赤酵母方案第 1 版，了解有关使用毕赤酵母的更多信息。
•了解有关 Invitrogen 其他毕赤酵母表达系统的更多信息。
参考文献
1.Cereghino JL, Cregg JM.Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris.FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66.[PubMed]
2.Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM.Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris.Curr Opin Biotechnol.2002 Aug;13(4):329-32.[PubMed]
3.Cregg JM.简介：毕赤酵母与其他表达系统的区别。Methods Mol Biol.2007;389:1-10.[PubMed]
4.Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. 酵母菌毕赤酵母中的表达。Methods Enzymol.2009;463:169-89.[PubMed]
5.Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA.酵母菌毕赤酵母两个酒精氧化酶基因的功能鉴定。Mol Cell Biol.1989 Mar;9(3):1316-23.[PubMed]
毕赤酵母表达系统的优势：
•使得毕赤酵母细胞的培养如同大肠杆菌一样简单
•获得优于其他微生物表达系统的细胞密度。
•每个细胞生成的蛋白多于其他微生物表达系统。
•从真核蛋白加工、蛋白折叠和翻译后修饰中受益。
•易于从摇瓶发酵扩展到工业规模的发酵。
成熟的蛋白表达系统
在过去的 30 年里，毕赤酵母被世界各地的实验室和行业用于生产许多物种（包括人）的数百种不同蛋白（参考文献 1、2、3）。毕赤酵母可像细菌（大肠杆菌）或酵母菌（酿酒酵母）一样易于生长，且可提供超出这些系统的许多优势（参考文献 4）。毕赤酵母可生长至远远高于细菌或其他酵母菌的细胞密度。毕赤酵母能够以甲醇为单一碳源进行生长，使其规模扩大至工业水平的成本相对低廉。
AOX1 启动子的作用
EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒采用来自毕赤酵母醇氧化酶 1 (AOX1) 基因的启动子来启动蛋白的生产。毕赤酵母能够以甲醇为单一碳源进行生长。以甲醇为单一碳源生长时，AOX1 mRNA 最多可占总 mRNA 的 5%，而 AOX1 酶最多可占细胞重量的 30%（参考文献 5）。
EasySelect™毕赤酵母表达系统随附 pPICZ 和 pPICZα 载体。pPICZ 和 pPICZα 载体包含一个多克隆位点 (MCS)，可在 AOX1 启动子的控制下插入您的目标基因。pPICZ 和 pPICZα 载体还含有 c-Myc 标签（便于检测）和多聚组氨酸 (6xHis) 标签（便于检测和纯化蛋白）。
由于毕赤酵母自然分泌少量蛋白，可以使用 pPICZα 载体中的细胞外信号转导序列促使目标蛋白分泌至培养基中，以简化下游纯化。
获得整合 Zeocin™ 抗生素的高拷贝数
EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒采用 Zeocin™ 抗生素选择转化的毕赤酵母细胞。pPICZ 和 pPICZα 载体含有来自印度斯坦链异壁菌 (Sh ble) 的博来霉素基因，可获得对 Zeocin™ 抗生素的耐药性。pPICZ 和 pPICZα 载体可稳定整合至毕赤酵母基因组中。通过增加 Zeocin™ 抗生素的浓度，您可以轻松选择具有较高整合数量和较高蛋白表达水平的克隆。
EasySelect™毕赤酵母表达试剂盒包含以下组成部分：
•毕赤酵母和大肠杆菌拭子瓶菌株，用于启动培养。
•用于制备可转化的毕赤酵母细胞的溶液。
•用于将目标基因与 AOX1 启动子融合的 pPICZ 和 pPICZα 载体。
•用于确认基因已插入 pPICZ 载体的测序引物。
•用于选择转化的毕赤酵母细胞的 Zeocin™ 抗生素。
仅供研究使用。不适用于诊断程序。
相关链接
•查看 pPICZ A、B、C 载体的产品插页 (PDF)。
•查看 pPICZα A、B、C 载体的产品插页 (PDF)。
•查看 Zeocin™ 抗生素的产品插页 (PDF)。
•查看 Invitrogen 提供的毕赤酵母方案第 1 版，了解有关使用毕赤酵母的更多信息。
•了解有关 Invitrogen 其他毕赤酵母表达系统的更多信息。
参考文献
1.Cereghino JL, Cregg JM.Heterologous protein expression in the methylotrophic yeast Pichia pastoris.FEMS Microbiol Rev. 2000 Jan;24(1):45-66.[PubMed]
2.Cereghino GP, Cereghino JL, Ilgen C, Cregg JM.Production of recombinant proteins in fermenter cultures of the yeast Pichia pastoris.Curr Opin Biotechnol.2002 Aug;13(4):329-32.[PubMed]
3.Cregg JM.简介：毕赤酵母与其他表达系统的区别。Methods Mol Biol.2007;389:1-10.[PubMed]
4.Cregg JM, Tolstorukov I, Kusari A, Sunga J, Madden K, Chappell T. 酵母菌毕赤酵母中的表达。Methods Enzymol.2009;463:169-89.[PubMed]
5.Cregg JM, Madden KR, Barringer KJ, Thill GP, Stillman CA.酵母菌毕赤酵母两个酒精氧化酶基因的功能鉴定。Mol Cell Biol.1989 Mar;9(3):1316-23.[PubMed]
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
耐抗生素细菌Zeocin™ (ZeoR)
细菌或酵母菌株GS115, KM71H, X-33
克隆方法限制性内切酶/MCS
表达机制基于细胞的表达
表达系统酵母
适用于（应用）蛋白表达
产品线EasySelect
产品类型表达试剂盒
蛋白标记His 标签 (6x)、c-Myc 表位标签
数量1 个试剂盒
选择试剂（真核生物）Zeocin
细胞类型酵母细胞
产品规格试剂盒
促进剂AOX1
种属毕赤酵母
矢量pPIC
Unit SizeEach
内容与储存
EasySelect 毕赤酵母表达试剂盒包括各 20 µg 质粒 pPICZ A、B 和 C 以及 pPICZα A、B 和 C；毕赤酵母菌株 X-33（野生型）、GS115 (his4)、KM71H (arg4 aox1::ARG4) 和用于细胞内和分泌表达的对照菌株；250 mg Zeocin™ 抗生素；培养基（YP 和 YNB）、EasyComp™ 毕赤酵母转化试剂盒、各 2 µg 5´ AOX1、3´ AOX1 和 α 因子测序引物。pPICZ 和 pPICZα 载体也可单独购买。用 pPICZ 提供lacZ 阳性表达对照，
将菌株储存于 +4°C 下。在 -20°C 下储存载体和引物妥善储存时，可保证所有组分稳定储存 6 个月。
将菌株储存于 +4°C 下。在 -20°C 下储存载体和引物妥善储存时，可保证所有组分稳定储存 6 个月。
常见问题解答 (FAQ)
当使用pPIC6/pPIC6α载体在X-33酵母株中筛选杀稻瘟菌素抗性转化株时，为什么在含300 μg/ml杀稻瘟菌素的YPD培养皿中得到的菌落有大有小？
我的转化失败了。你们有何建议？
我成功制备了两次Pichia的原生质球，之后就制备不成功了。培养物的OD值根本不降低。
Pichia pastoris和S. cerevisiae的培养基有哪些不同种类？
使用组成型表达载体（如pGAPZ）进行发酵，是否有推荐的实验方案？
引用和文献 (10)
引用和文献
Abstract
Fas ligand deficiency in HIV disease.
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:9159165
'Apoptosis is postulated to be involved as an anti-viral immune mechanism by killing infected cells before viral replication has occurred. The Fas-Fas ligand interaction is a powerful regulator of T cell apoptosis and could potentially act as a potent anti-viral immune mechanism against T cell tropic virus such as human
A composite Ets/Pit-1 binding site in the prolactin gene can mediate transcriptional responses to multiple signal transduction pathways.
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:7673116
'Binding sites for the tissue-specific transcription factor, Pit-1, are required for basal and hormonally induced prolactin gene transcription. Although Pit-1 is phosphorylated in response to several signaling pathways, the mechanism by which Pit-1 contributes to hormonal induction of gene transcription has not been defined. Recent reports suggest that phosphorylation of
Expression and secretion of a biologically active glycoprotein hormone, ovine follicle stimulating hormone, by Pichia pastoris.
Journal:J Mol Endocrinol
PubMed ID:9845673
'The methylotrophic yeast, Pichia pastoris, has been used to co-express recombinant genes formed by fusion of the mating factor-alpha (MFalpha) leader and ovine follicle stimulating hormone (oFSH) alpha and beta subunit coding sequences. Pichia strains carrying single copies of the two fusion genes secreted recombinant oFSH (roFSH) to concentrations of
Improved tumour targeting by disulphide stabilized diabodies expressed in Pichia pastoris.
Journal:Protein Eng
PubMed ID:9488147
'Diabodies are dimeric antibody fragments held together by associated heavy and light chain variable domains present on different polypeptide chains. To improve their stability we have introduced cysteine residues into the V-domains to promote the disulphide crosslinking of the dimer. A crosslinked bivalent diabody against carcinoembryonic antigen (CEA) and a
High-level expression of recombinant Aplysia ADP-ribosyl cyclase in offhia pastoris by fermentation.
Journal:Protein Expr Purif
PubMed ID:9325145
'Cyclic ADP-ribose (cADPR), a Ca2+ mobilizing cyclic nucleotide derived from NAD+, is rapidly emerging as an endogenous modulator of Ca2(+)- induced Ca2+ release mechanisms in various cellular systems. ADP ribosyl cyclase, first isolated from the marine invertebrate Aplysia californica, cyclizes NAD+ to cADPR. In this study we have utilized the