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两个载体的骨架非常相似。主要的不同在于pCR4-TOPO载体测序引物位点距离PCR产物插入位点仅33 bp。这使得对插入序列进行测序时需要读取的载体序列能最小化,从而使pCR4-TOPO载体非常适合进行测序应用。
两个载体的骨架非常相似。主要的不同在于pCRII-TOPO 载体是一个双启动子载体,包含SP6和T7启动子用于体外转录/测序,而 pCR2.1-TOPO仅包含T7启动子用于体外转录/测序。两个载体均含有M13 正向和反向引物位点用于测序或PCR检测。
对照模板的序列是受专利保护的。
我们建议起始摩尔比为1:1(插入片段:载体),范围为0.5:1到2:1(插入片段:载体)。对TOPO克隆来说,2kb大小的 PCR产物的ng值应在5- 10ng之间。 计算公式:< br / > 插入片段长度(bp)/ 载体长度(bp)x 载体用量(ng)= 插入片段:载体比为1:1时所需的插入片段的用量(ng)。
您可能需要尝试不同的插入片段:载体比例,范围从1:1至15:1。 公式: length of insert (bp)/length of vector (bp) x ng of vector = ng of insert needed for 1:1 insert:vector ratio (插入片段长度 (bp) X 载体重量(ng) ) / 载体长度 (bp) = 插入片段:载体比例为1:1时所需的插入片段重量(ng)