测序用 Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒可提供高效、5 分钟的一步克隆策略，用于将校正性聚合酶–扩增平末端 PCR 产物直接插入质粒载体中以进行测序。每个试剂盒均使用含经过特殊设计的测序引物位点（可从各反应中获得更多的插入序列和更少的载体序列）的 pCR™4Blunt-TOPO™ 载体（参见图）。这些试剂盒包括克隆和选择包含您首选 PCR 片段的重组载体所需的所有物品。

pCR™4Blunt-TOPO™ 载体—针对测序进行优化
我们从 pCR™4Blunt-TOPO™ 载体中删除了大量的多克隆位点，以将测序引物位点与插入位点之间的距离缩短至 33 bp。这意味着测序反应具有更少的载体序列和更多的插入序列。pCR™4Blunt TOPO™ 载体具有 4 种常见测序引物的位点：M13 正向、M13 反向、T7 和 T3。该试剂盒包括各等份试液。

pCR™4Blunt-TOPO™ 克隆选择和操作
pCR™4Blunt-TOPO™ 载体包含氨苄青霉素和卡那霉素抗性标记物以及用于阳性选择的 LacZα-ccdB 基因融合。载体的尽可能减少的化多克隆位点仍包括用于克隆 PCR 产物简化切除的旁侧 EcoRI 位点和用于在测序前生成嵌套缺失的唯一 Sse8387I 位点。’T7 和 T3 启动子也用于体外转录。

简化的基于 TOPO™ 的克隆
使用 TOPO 克隆技术，无需使用含有特异性序列的 PCR 引物、PCR 后程序、载体制备或其他耗时长的 DNA 操作步骤。™只需将 PCR 反应物直接添加至提供的拓扑异构酶带电载体中，孵育 5 分钟，并使用提供的大肠杆菌感受态细胞进行转化。

高效克隆
携带所需插入片段的克隆高达 95%，您可以筛选更少的克隆体，节省时间和成本。该试剂盒中使用的 pCR™4Blunt-TOPO™ 载体无突出端，用于高效连接由校正性耐热聚合酶（可留下平末端 PCR 产物）产生的 PCR 产物。

克隆标准
在克隆方面，TOPO™ 克隆技术已作为一种可靠技术供成千上万的科学家使用达十余年。快速、简单易用且高效的 TOPO™ 克隆已在多种应用中应用于多种不同载体。

测序用 Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒—试剂盒规格
根据您的需求，测序用 Zero Blunt™ TOPO™ PCR 克隆试剂盒可与可提供不同优势的多种感受态细胞一起购买：

• 一般克隆：TOP10 细胞（货号K2875-J10、K2875-20、K2875-40）
• 高效克隆：TOP10 Electrocomp™ 细胞（货号号 K2880-20、K2880-40）
• 一般克隆，噬菌体 T1 抗性：DH5α-T1R（货K2895-20）
• 快速生长：Mach1™-T1^R 化学感受态大肠杆菌（货号 K2835-20）

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