pTrcHis TOPO™ TA 表达试剂盒

我们不建议将感受态细胞保存在液氮中，因为极端温度会损害细胞。另外，装感受态细胞的塑料管子可能承受不了如此低的温度，从而发生破裂。

我们推荐将感受态细胞存储在-80摄氏度。高于这个温度，即使存储时间很短，也会显著降低其转化效率。

TOP10、DH5α、其他克隆菌株
优点：
- 省时，可直接从克隆到表达。
-甘油储液更稳定，因为这些菌株的基因型是endA-和recA-。
缺点：
-如果目的基因具有毒性，则克隆步骤会变得困难。
-这些克隆菌株不是蛋白酶缺陷型的；因此，蛋白质可能被降解。

BL21 Sta（DE3）或BL21（DE3）
优点：
-这些表达菌株是蛋白酶缺陷型的。
缺点：
-您需要将质粒转化到表达菌株中。
-甘油储液可能不稳定，因为这些表达菌株的基因型不是endA-和recA-。
-（DE3）部分是多余的，因为启动子不需要T7 RNA聚合酶。

pTrc启动子可被大肠杆菌RNA聚合酶识别，而不是T7聚合酶，因此，pTrc启动子可在任何大肠杆菌菌株中表达，而不仅仅是BL21菌株。所以，您可使用Top10、DH5α等进行表达。但是，如果您的目的基因具有毒性，则会因表达渗漏而出现克隆困难。

一种被称为CAP（代谢产物活化蛋白）的转录激活蛋白，通常可结合到trc启动子的上游并激活转录。该蛋白需要cAMP才能与DNA结合。在培养基中加入葡萄糖可降低细胞内cAMP水平。在LB培养基和琼脂板中补充葡萄糖，会抑制trc启动子的基础水平转录。为确保插入片段的稳定性，我们建议您在选择培养基中加入25 mM或0.5%葡萄糖。