BLOCK-iT™ 腺病毒 RNAi 表达系统

请使用推荐的滤波装置对所用荧光进行检测。使用倒置荧光显微镜进行分析。如有需要，可使蛋白表达持续1-3天，再进行荧光检测。

所用目标序列可能与其他基因具有较高的同源性；请选择一个不同的目标区域。

做一个杀死曲线，确定细胞株对抗生素的敏感性。应确保将病毒储液正确保存于-80°C，并且冻融次数不超过3次。最后，使用Polybrene试剂，将重组慢病毒转导至细胞。

应确保所用的感受态细胞被正确保存于-80°C，在冰上融化并立即使用。加入DNA时，轻轻混合感受态细胞：不要使用移液管反复吹打混合。同时，转化所用DNA不要超过最大推荐用量（100 ng），或者DNA加入体积不要超过感受态细胞体积的10%，否则会抑制转化。

请确保您使用的含胎牛血清（FBS）的培养基已减少了四环素含量。许多FBS都含有四环素，因为FBS往往是从饮食中含四环素的牛体内分离出来的，这导致出现低水平的shRNA本底表达。应确保使用可表达Tet阻遏蛋白的细胞系，并以合适的MOI进行转导。如果您自行建立了可表达Tet阻遏蛋白的细胞系，则应在使用shRNA重组体转导细胞前至少等待24小时。