Expressway™ Maxi 无细胞大肠杆菌表达系统

Expressway™ Maxi 无细胞大肠杆菌表达系统使用高效的偶联转录/翻译反应，在 4- 6 小时内生产出毫克级可溶性、功能活性的蛋白。可在单反应管中完成程序，无需专门的设备即可轻松扩展。提供 TOPO TA Cloning™ 表达载体（效率达 95% 的 5 min 克隆）获得最佳的表达结果。除了开放式表达系统的所有优点外，Expressway™ Maxi 技术还提供了一种方式来生产高水平的重组蛋白，可轻松检测出并经过纯化用于各种下游应用。

4-6 小时内完成毫克级的蛋白生产
Expressway™ Maxi 技术的关键是专有的饲养缓冲液配方提高了反应生产效率，使得 4-6 小时内即可在 2 mL 反应中生成超过一毫克的蛋白（图 1）。裂解物的配方支持使用圆形或线性模板进行蛋白合成。

兼容高通量 (HTP)
此系统也可用于 HTP 表达。一个试剂盒适用于 200 x 50 次反应，可通过 2 x 96 孔板完成。若无饲料缓冲液，此类反应仅需两小时时间。一旦检测到阳性表达，可使用大规模 Expressway™ 无细胞形式或基于大肠杆菌细胞的系统扩大蛋白生产。

优化的载体
pEXP5 TOPO™ TA 载体经过优化，可在 Expressway™ 毫克系统中使用（图 2）。它们旨在尽可能减少可能干扰天然蛋白折叠和功能的其他氨基酸序列。这些载体的特点包括：

• pEXP5-NT/TOPO™ 表达载体提供 N 端组氨酸标签和 TEV 蛋白酶识别位点

• pEXP5-CT/TOPO™ 表达载体可用于通过 C 端组氨酸标签表达蛋白，或通过在目的基因末端引入终止密码子来表达天然蛋白

简单快速的程序
Expressway™ Maxi 无细胞表达系统可提供实现最佳无细胞蛋白生产所需的所有组分。该系统包括大肠杆菌提取物、IVPS 反应缓冲液、饲养缓冲液、T7 酶混合物、19 氨基酸混合物和单独的蛋氨酸管。要开始 2 mL 反应，请将反应缓冲液、19 氨基酸混合物、您选择的标记或未标记的蛋氨酸和半胱氨酸、T7 酶混合物以及您的 DNA 模板（带 T7 启动子）与大肠杆菌提取物混合。孵育 30 分钟后，加入饲养缓冲液。毫克级活性蛋白可在 4-6 小时内合成。要进行 HTP 表达，只需预混合所有组分并分装为 HTP 规格。