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有两种简单的方法。一种是通过60°C放置20分钟热灭活细胞。第二种是将细胞放入70%乙醇。乙醇固定的细胞可以在冰箱中无限期储存直到使用,可达好几年。 1.离心细胞、使细胞沉淀并去除上清 2.固定细胞:在15mL含有细胞团的试管中加入10 mL70%冰乙醇,先开始逐滴加入后震荡,混合均匀。 3.在冰箱中储存直到使用。 4.快使用时,水洗两次且在选择的缓冲液中重悬。
•用于流式细胞仪分析的LIVE/DEAD可固定试剂盒适用于固定。这些试剂盒使用胺基反应细胞-非渗透染料对活细胞细胞表面和死细胞胞质染色——活细胞暗淡死细胞明亮。因为染料共价结合到细胞,固定后保留。不幸的是,此方法对基于成像的实验效果不好,由于所有细胞都被染色,很难通过显微镜从暗淡的活细胞中分辨出明亮的死细胞。 •Image-IT DEAD绿色活性染料(货号I10291),用于成像和高通量扫描(HCS)分析的,是一种活细胞非透过型DNA结合染料,固定且透过后可保留长达48小时。 •我们同时推出用于成像分析的LIVE/DEAD Reduced Biohazard Cell Viability试剂盒(货号L7013),其含有两种DNA结合染料,SYTO 10和Dead Red,可以有效染色且通过4%戊二醛固定后快速分析。 注:总的来说,DNA结合的染料和钙黄绿素AM不适用于固定,由于这些染料不能共价地结合到细胞组分上,因此会在固定后缓慢扩散出细胞,逐渐地将所有细胞都染色。
许多抗体和染色剂会标记死细胞。如果您不把死细胞从分析中排除,相关数据将受到干扰。当然,如果你标记的是固定细胞,由于其本身已经死亡,就不再需要添加活性染色剂。但是,如果你们在固定前标记细胞,就需要使用LIVE/DEAD 固定死细胞染色剂。
Attune NxT声波聚焦流式细胞仪检测的下限是0.5 µm。
Attune NxT自动进样器是Attune NxT声波聚焦流式细胞仪的可选附件,能够快速分析至多384份样品。对于不同形式平板——无论96孔还是384孔板——它都具有广泛的兼容性。内置智能探针,最大限度避免堵塞和截留(<0.5%),防止损坏仪器。该仪器通过通气而不是振荡混合,确保样品的均质性,同时维持细胞的活性。它还可作为Attune NxT流式细胞仪关机程序的一个步骤来执行自动清洗。无论采用何种取样方法(试管或平板)和数据采集速率,它都能提供一致的数据。