Colloidal 胶体蓝染色试剂盒

不能。我们不建议使用胶体蓝（G-250）染色试剂盒对膜进行染色，因为这会产生很高的背景。更好的染色方法包括：

1.Invitrogen可逆性膜蛋白质染料（货号IB7710）：可对硝化纤维素膜和PVDF膜上的蛋白质进行完整的可逆性染色。该产品的灵敏度高于丽春红S（在10分钟内检测到蓝色条带上<10 ng的BSA），可在5分钟内实现可逆性染色。免疫印迹检测不受染色和清除染料过程的影响，在某些情况下可达到更高的灵敏度。
2.Coomassie（非胶体）染色：使用溶于50%甲醇的0.1% Coomassie Blue R-250染色5分钟，然后用50%甲醇和10%乙酸洗涤多次进行脱色。用水洗涤多次、风干并在-20℃下保存，最长可保存12个月。灵敏度约为50-100 ng。
3.SimplyBlue SafeStain染液。SimplyBlue SafeStain使用手册中有对干燥PVDF膜进行染色的实验方案，但不推荐将其用于湿润的PVDF膜或硝化纤维素膜，因为会产生较高的背景。
4.酰胺黑染液：与Coomassie相同，但灵敏度更低。请参见使用手册中的实验方案。
5.丽春红S染液：与Coomassie相同，但灵敏度更低。请参见使用手册中的实验方案。
6.紫外透照法：转印后，将膜放在滤纸上，在室温下干燥10分钟。在20%甲醇中润湿，在湿润状态下于白光前观察印迹；条带会比膜看起来更透明。如果条带随膜变干而消失，则再次润湿膜。

与预染ladder中蛋白质结合的染料带有电荷并且与蛋白是共价结合的，因此，预染ladder的转印效率几乎总是高于SDS变性蛋白。所以，预染ladder不是衡量转印成功率最好的检测手段。此外，Invitrogen可逆性膜蛋白质染色试剂盒可对硝化纤维素和PVDF膜上的蛋白质进行完全且可逆地[的]染色。该产品的灵敏度高于丽春红S（在10分钟内检测到蓝色条带上<10 ng的BSA），并可在5分钟内实现可逆性染色。免疫印迹检测不受染色和清除染料过程的影响，并且在某些情况下可达到更高的灵敏度。

可以，胶体蓝染料可在免疫印迹前使用。但是，为得到理想的转印效率，我们建议进行凝胶脱色处理，然后在一系列Tris 碱/甘氨酸/SDS溶液中平衡，增加染料的溶解；转印完成时，应使用甲醇处理膜，从而在之前去除染料[从而在化学发光显影前去除染料]（不需要在化学发光检测前进行脱色处理）。

丙烯酰胺浓度低于10%的凝胶，通常背景较高，因为低比例丙烯酰胺凝胶具有较大的孔，胶体可渗入和停留在这些孔中。去除多余背景的方法为，将凝胶放在25%甲醇溶液中孵育，直至获得干净的背景。应注意，这种方法也会去除条带上的部分染色剂。在浓度>25%的甲醇溶液中长时间孵育，可导致蛋白质条带和背景完全脱色。

可以，您可以用水将凝胶完全脱色后从头开始染色操作，或者，如果您感觉染色力度还是有点低并且想要加深染色，可将凝胶直接放回染色液中。