InVision™ His-Tag 胶内染色试剂盒
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Invitrogen™

InVision™ His-Tag 胶内染色试剂盒

The InVision His-tag In-gel Staining Kit includes InVision His-tag In-gel Stain as well as BenchMark His-tagged Protein Standard. InVision His-tag了解更多信息
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The InVision His-tag In-gel Staining Kit includes InVision His-tag In-gel Stain as well as BenchMark His-tagged Protein Standard. InVision His-tag In-gel Stain is a ready-to-use, fast, sensitive, and highly specific stain for visualizing His-tagged fusion protein bands directly in a polyacrylamide gel following electrophoresis.

Features:
• Stain proteins fused to an oligohistidine sequence
• Eliminate western blotting—detect His-tagged proteins directly in the gel
• Detect nanogram levels of protein bands with a UV transilluminator or imaging equipment with appropriate filters or lasers
• Visualize results in under three hours

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Fast and easy staining
The InVision His-tag In-gel Stain protocol is easy to perform and requires very little hands-on-time, allowing for rapid and scalable protein expression screening in a variety of gel types. Following electrophoresis, the gel is fixed, incubated in the stain, washed, and the specific His-tagged fusion protein detected by exposing the gel to UV or visible light. In under three hours, nanogram levels of His-tagged fusion protein can be detected. After documenting your InVision Stain signal, total protein staining can be performed.
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
检测定位凝胶内检测
检测方法荧光
产品线InVision™
产品类型His 标签蛋白胶内染色试剂盒
数量1 kit
靶标分子蛋白质(His 标记)
标签或染料InVision His-Tag 染料
Unit SizeEach
内容与储存
InVision™ His 标签胶内染料以 1X 即用型染色试剂 (500 mL) 的形式提供。试剂盒中还包含 BenchMark™ His 标签蛋白标准品 (125 μL)。

常见问题解答 (FAQ)

我使用InVision His-Tag In-Gel Stain对His标签融合蛋白染色,并使用BenchMark His标签蛋白标准品作为阳性对照。结果看到BenchMark His标签蛋白标准品出现一些多余条带。问题出在哪里?

这可能是因为曝光过度——为检测低表达水平的目标蛋白而加长曝光时间,可能导致BenchMark His标签蛋白标准品中的微量污染物显色。可降低BenchMark His标签蛋白标准品的上样量,或者先以较短的曝光时间对标准品进行成像,然后以较长的曝光时间对低表达水平蛋白进行成像。

我在使用InVisionHis-Tag In-Gel Stain时,得到了较高的、不均匀的背景。你们有何建议?

以下是可能原因和解决方案:

•遗漏了洗涤步骤。应使用20 mM磷酸盐缓冲液洗涤凝胶2次。如果背景很高,应进行第3次水洗并洗涤10分钟。 •水质较差。应使用超纯水(电阻率大于18 megohm/cm)洗涤和制备磷酸盐缓冲液。
•蛋白质上样量过多。降低蛋白浓度或减少上样体积。
•成像平台不干净。每次进行凝胶成像前都应使用纸巾清洁成像系统,以最大程度的降低背景荧光。
•非特异性条带。强碱性蛋白和二价金属结合蛋白,如碳酸酐酶(30 kDa)、SlyD(21 kDa)和磷酸化酶 B(97 kDa),可与染色剂发生交叉反应,产生非特异性条带。

我在使用InVisionHis-Tag In-Gel Stain时,得到的染色效果很弱。你们有何建议?

以下是可能原因和解决方案:

•染色不充分。应使用适合所用凝胶类型的染色方案。使用BenchMark His标签蛋白质标准品作为阳性对照,对染色试剂和方案进行验证。避免过度洗涤凝胶。
•凝胶显色或成像不恰当。应使用带有照相机的紫外透照仪和具有正确滤镜的激光扫描仪(详情见使用手册)进行凝胶成像。不建议使用Polaroid照相机。应确保照相机光圈打开并有足够的光进入,并且照相机应连接到可调整对比度的成像软件上,从而获得最佳的图像。完成洗涤步骤后,应立即对凝胶成像。将凝胶保存在磷酸盐缓冲液中,会降低信号强度。
•蛋白上样量或表达水平较低。应使用总蛋白染色剂对凝胶进行染色,检测凝胶的总蛋白含量(见使用手册第13页)。至少上样1 pmole的His标签融合蛋白进行检测。应确保His标签是框内融合[读码框正确],并且蛋白表达正常。

InVision His-Tag In-Gel Stain能否用于E-PAGE凝胶染色?

由于E-PAGE凝胶比标准小型凝胶更厚,因此,使用InVision His-Tag In-Gel Stain染色会产生过强的背景。为获得更好的染色灵敏度,我们建议先将E-PAGE凝胶上的蛋白质转印到硝化纤维素膜上,然后根据使用手册第14页的说明使用InVision His-tag In-gel Stain对印迹膜进行染色。

经过InVision His-Tag In-Gel Stain染色的His标签融合蛋白,能否用于免疫印迹分析?

为了将经过InVision His-Tag In-Gel Stain染色的His标签融合蛋白用于免疫印迹分析,应该

•在His标签融合蛋白染色后,记录凝胶的永久性图像
•将凝胶置于1X SDS电泳缓冲液中平衡1小时。
•使用所选方法进行免疫印迹分析和免疫检测。