SimplyBlue™ SafeStain

不能。我们不建议使用胶体蓝（G-250）染色试剂盒对膜进行染色，因为这会产生很高的背景。更好的染色方法包括：

1.Invitrogen可逆性膜蛋白质染料（货号IB7710）：可对硝化纤维素膜和PVDF膜上的蛋白质进行完整的可逆性染色。该产品的灵敏度高于丽春红S（在10分钟内检测到蓝色条带上<10 ng的BSA），可在5分钟内实现可逆性染色。免疫印迹检测不受染色和清除染料过程的影响，在某些情况下可达到更高的灵敏度。
2.Coomassie（非胶体）染色：使用溶于50%甲醇的0.1% Coomassie Blue R-250染色5分钟，然后用50%甲醇和10%乙酸洗涤多次进行脱色。用水洗涤多次、风干并在-20℃下保存，最长可保存12个月。灵敏度约为50-100 ng。
3.SimplyBlue SafeStain染液。SimplyBlue SafeStain使用手册中有对干燥PVDF膜进行染色的实验方案，但不推荐将其用于湿润的PVDF膜或硝化纤维素膜，因为会产生较高的背景。
4.酰胺黑染液：与Coomassie相同，但灵敏度更低。请参见使用手册中的实验方案。
5.丽春红S染液：与Coomassie相同，但灵敏度更低。请参见使用手册中的实验方案。
6.紫外透照法：转印后，将膜放在滤纸上，在室温下干燥10分钟。在20%甲醇中润湿，在湿润状态下于白光前观察印迹；条带会比膜看起来更透明。如果条带随膜变干而消失，则再次润湿膜。

可以，胶体蓝染料可在免疫印迹前使用。但是，为得到理想的转印效率，我们建议进行凝胶脱色处理，然后在一系列Tris 碱/甘氨酸/SDS溶液中平衡，增加染料的溶解；转印完成时，应使用甲醇处理膜，从而在之前去除染料[从而在化学发光显影前去除染料]（不需要在化学发光检测前进行脱色处理）。

这可能与TCA未被洗干净有关，因为TCA会降低溶液的pH，引起染色剂聚集。我们建议先用大量水洗涤2次，每次5分钟，最后再用水洗涤1小时以上（如果需要，可以洗涤过夜）。或者，也可以使用过量的SimplyBlue SafeStain进行染色。

Coomassie G250比Coomassie R250更灵敏，而Coomassie R250比Coomassie G250的染色速度更快。

您可以使用SimplyBlue SafeStain对PVDF膜进行染色，以检测待测序的蛋白质。在检测后和测序前，使用20–30%乙醇洗涤膜，除去残留的染料。