转染后有一些因素会影响表达,但在逐一排除这些可能性之前,应使用GFP mRNA阳性对照(Tri-Link CleanCap EGFP mRNA, 货号L-7201)和Lipofectamine MessengerMAX mRNA转染试剂来尝试转染实验。 如果这一操作都未获得良好的转染结果,最好尝试使用一种替代的导入方法或换用另一种细胞。不过,如果这一实验获得了可接受的结果,下一步则可尝试使用感兴趣的mRNA和MessengerMAX试剂进行转染。如果此时仍未获得理想的表达水平,则可能是所使用mRNA的问题,故障排除可能需要从此方面出发来考虑。举例来说,一些可能涉及的问题包括:有5’帽吗?有多聚A尾吗?mRNA纯度如何?是否在凝胶电泳中获得了单一条带?DNA模板是否纯净?