含传感器 LC3B、p62 或串联传感器 RFP-GFP-LC3B 的 Premo 自噬检测试剂盒

使用 Premo 自噬检测试剂和传感器（基于 LC3B 或 p62 连接荧光蛋白嵌合体或 RFP-GFP-LC3B 串联传感器），可轻松监测细胞自噬的不同阶段。使用 Premo 自噬检测试剂盒，您可选择 Premo 自噬传感器，其基于自噬相关蛋白 LC3B 或 p62、绿色 (GFP) 和/或红色荧光蛋白 (RFP) 嵌合体且具有 BacMam 技术的转导效率。转导或甚至共转导可在包括神经元和神经干细胞 (NSC) 在内的多种细胞中进行，使用简单的方案即可实现，过程包括向细胞中添加 BacMam 2.0 嵌合试剂，孵育过夜，然后使用标准 GFP（绿色荧光蛋白）和/或 RFP（红色荧光蛋白）设置就可以实现转导可视化。

Premo 自噬传感器利用自噬相关蛋白 LC3B 或 p62 以及 GFP 或 RFP 检测细胞中自噬的诱导或抑制。Premo 自噬传感器使用 BacMam（昆虫杆状病毒 (Bac) 与哺乳动物 (Mam) 启动子）技术进行转导，可实现自噬体嵌合蛋白的清晰可视化。BacMam 试剂不会在哺乳动物细胞中复制，因此可以安全地处理。它们也没有细胞毒性，并且为即用型产品。与典型表达载体不同，BacMam 试剂支持可滴定且可重现的表达，并可提供很高的共转导效率，因此易于在同一细胞中使用多种 BacMam 试剂。BacMam 系统近来的改良使得多种细胞（包括神经元及神经干细胞 (NSC)）的高效转导可通过简单的一步式方案实现。如要实现自噬的可视化，只需将 BacMam 自噬传感器添加至细胞中并孵育过夜，即可实现蛋白表达，然后使用仪器上的标准 GFP 和/或 RFP 荧光设置检测信号。

LC3B 蛋白在自噬中发挥着关键的作用。正常情况下，该蛋白存在于细胞溶质中，但经磷脂酰乙醇胺切割和脂化后，LC3B 与吞噬泡相关。这种定位可用作自噬膜的一般标记物。p62 蛋白又称 sequestosome (SQSTM1)，是一种泛素结合蛋白，可作为要被细胞自噬机制降解的运载物的受体。在诱导发生自噬时，p62 蛋白定位至自噬体并随后被降解。相反，随着对自噬的抑制，p62 蛋白会在自噬体中积累。因此，p62-荧光蛋白嵌合体的亚细胞定位可作为自噬诱导和抑制的有用标记物。

此外，通过在串联传感器 RFP-GFP-LC3B 中结合使用一种对酸敏感的 GFP（即祖母绿 GFP）与一种对酸不敏感的 RFP（即 TagRFP），可以观察到从自噬体（中性 pH 值）到自噬溶酶体（酸性 pH 值）的变化，其图像特征为溶酶体融合后在自噬体酸化的情况下 GFP 荧光出现特异性损失。诱导自噬时，Premo 串联自噬传感器会标记点状自噬体；这些结构的 GFP 和 RFP 均为阳性。一旦溶酶体发生融合，pH 值即会下降，这会导致 GFP 淬灭，使自噬溶酶体呈红色。此外，将 Premo 自噬串联传感器与发射远红光的 LysoTracker Deep Red（单独提供）相结合，可对自噬体/自噬溶酶体/溶酶体动态变化进行三色分析。

每种 Premo 自噬检测试剂盒均包括二磷酸氯喹，其用作抑制自噬的阴性对照品。

使用 Premo 自噬检测试剂的优势
• 受到多通路技术的启发 — 将 Premo 自噬串联传感器与发射远红光的 LysoTracker Deep Red 相结合，可对完整的自噬途径动态变化进行三色分析
• 高效递送系统 — 对多个哺乳动物细胞系（包括原代细胞、干细胞和神经元）均可实现 >90% 的转导率
• 快速且便利 — 只需将 Premo 自噬试剂加入到您的细胞中，过夜孵育，随后即可成像；或者冷冻储存，以便后续试验直接使用
• 稳健 — Premo 自噬试剂不会在哺乳动物细胞中复制，无可观测的细胞病变效应，并且适用于1级生物安全等级 (BSL) 方案
• 多种配置：—Premo 自噬传感器可提供以下嵌合配置：
P36235：LC3B-GFP；对照品 LC3B (G120A)-GFP；P36236：LC3B-RFP；对照品 LC3B (G120A)-RFP；P36239：RFP-GFP-LC3B；P36240：GFP-p62；P36241：RFP-p62