Qubit™ dsDNA 定量试剂盒

这里有一些建议：

1.在“查看标准品”或"查看校准"下查看标准品的原始荧光值（RFU）。确认样本的荧光值落在标准品的荧光值之间（或稍稍高于最高的标准品）。如果不是，那么样本已经超过了检测的精确范围。请参看产品目录中的各个检测试剂盒的置信区间。如果检测样本超过了置信区间，那么检测读数将是2位有效数字而不是3位。 要使样本进入准确测定范围，可稀释样本或使用更多或更少体积的样本（例如，如果样本读值较低的话，使用10 µL而非2 µL）。

2.检查温度因素。检测是温度敏感性的，荧光信号在较高温度时会减弱。样本之间或样本和标准品之间的温度波动可能引发问题。
确保缓冲液和保存在DMSO内的Qubit试剂处于室温。缓冲液和Qubit试剂应保存于室温，而不是冰箱内。保存于 4°C的缓冲液即使在室温放置2–3小时仍然不能达到室温。
确保你的样本和工作溶液不能过热（包括刚从离心机取出时）。保留在Qubit仪器内过久或多次读取的样本可能会升温。如果你想对一个试管多次读数，你应该将它从仪器内取出，放置30秒以平衡至室温，然后进行下一次读数。另外，在读数之前，不要将试管握在手中过长时间，因为这会加热样本，使读数变低。

3.确保正确制备Qubit工作溶液（使用试剂盒内的缓冲液1:200稀释）。确保正确制备标准品（10 µL标准品加入到190 µL工作溶液中）。确保试管中加入至少200µL液体（对于标准品和样本均是如此）。

4.确保你使用的试剂和标准品是6个月之内的，并且标准品保存方法正确。Qubit试剂存储溶液应尽可能避光保存。

5.确保在Qubit荧光计上选择的程序跟你所用的Qubit检测试剂盒是匹配的。

6.读取标准品和样本数值时，确保仪器的盖子完全关闭。

7.使用推荐的检测管（检测管不能阻挡仪器盖上盖子，并且检测管应当光学透明）。某些类型的检测管可能有较高的自发荧光而影响检测。

8.你在Qubit仪器中输入你所加入到工作溶液中的存储液的微升数了吗？如果输入了，那么Qubit荧光计获得此信息后给出的浓度是你的存储液的浓度。如果没有输入，那么你得到的浓度是检测试管（你放入Qubit荧光计的试管）内的浓度——不是你的存储液浓度。

9.如果你是将Qubit检测的结果和使用UV吸光值获得的浓度进行比较，并且基于UV吸光值的浓度显著较高，那么可能是因为核酸或蛋白污染。Qubit检测试剂对于DNA, RNA和蛋白的检测特异性比吸光值测定法高得多。

请看我们的下列建议：

•确保孵育2分钟后再读取读数（对于蛋白，孵育时间为15分钟）。
•如果你将试管留在Qubit 荧光计内并多次读数，那么读数将随着试管在仪器内的升温而降低。如果你需要读取多个读数，请将试管从仪器中取出，放置于试管架上，让它与室温平衡至少30秒，然后再重新读取读数。
•如果样本是避光保存的，那么你可以在混匀后3小时内读取读数。超过这一时间，读数将不准确。
•在读取间隔，将标准品和样本试管保存于黑暗避光处。

PicoGreen染料和其它基于荧光定量的试剂不建议用于对染料偶联的核酸进行定量。核酸上携带的染料基团会干扰定量试剂的结合或荧光产生。

大致在20-mer或更短范围内的链信号水平较低。对于大部分由短链组成的dsDNA样本，仍可使用试剂，但应使用与样本长度相当的dsDNA标准品。

Qubit荧光计拥有高度优化的算法，可以使用 Qubit assays 或 Quant-iT DNA assays为您计算样本的浓度。使用MyQubit固件， Quant-iT PicoGreen DNA Assay也适用于Qubit荧光计。所有这些检测试剂的性能表现是相似的。

Quant-iT PicoGreen DNA Assay是最成熟和最通用的检测试剂。它需要标准品DNA和缓冲液的稀释，但是可以使用比色皿，微孔板和NanoDrop 3300进行测定。
Quant-iT DNA Assay提供了一个现成的缓冲液和预稀释的标准品DNA，可以使用96孔的微孔板来分析大量样本(>20个样本)，而无需进一步的调整。< br / > Qubit Assay适用于低通量（<20个样本）实验，并且仅能用Qubit荧光计读取数据。