293FT 细胞系

如果转染后不久（4小时至过夜）293FT细胞就从平板上脱离下来：
•这可能是Lipofectamine 2000的毒性所致。可能在转染前细胞种植密度过低。
•用户对这些细胞的操作可能不够轻柔（这些细胞有易于漂浮的倾向）。
•这些细胞可能在室温条件下放置时间过长。

如果在转染48-72小时的时间段内细胞脱离：
•如果细胞大片脱离，这可能是慢病毒产生的一个标志。

合胞体是由相邻的293FT细胞通过VSV-G诱导的融合效应所形成的大型多核细胞。合胞体的产生是获得高转染效率和慢病毒生成效果的一个表征。不过请记得，未产生合胞体并不意味着病毒没有生成。

293FT细胞系稳定表达源自pCMVSPORT6Tag.neo质粒的SV40大T抗原，该载体中同时也包含了新霉素抗性标志物。为了保持质粒的存在和表型的正常，细胞需要常规培养于含有500 μg/mL浓度Geneticin（G418）抗性的培养基中。

我们使用经测试不含支原体的Gibco FBS（货号 16000-044）。我们发现，如果按照产品手册中的说明以这款FBS培养293FT细胞时，病毒生成效率要比使用其他来源的血清更高。我们使用以下塑料器皿来培养293FT细胞：

T175—Fisher 货号 10-126-13；这是一款Falcon培养瓶，带有0.2 μm透气塞的密封盖。
T75—Fisher 货号 07-200-68；这是一款Costar培养瓶，带有0.2 μm透气塞的密封盖。
100 mm 平板—Fisher 货号 08-772E；这是一款针对组织培养应用进行预先处理的的Falcon聚苯乙烯平板。

在常规细胞培育条件下，我们应用这些平板获得了绝佳的细胞粘附效果。

If 293FT cells detach shortly after transfection (4 hours to overnight):

- This may be a sign of Lipofectamine 2000 toxicity. Cells may have been plated too sparsely prior to transfection.
- The cells may not have been handled gently enough (these cells have a tendency to lift off easily).
- The cells may have been kept at room temperature for too long.

If cells detach 48 to 72 hours post-transfection:
- If the cells lift off in large sheets, this may be a sign of lentivirus production.