pUC18 DNA

Thermo Scientific pUC18 载体是一种较小的高拷贝数大肠杆菌质粒，长度为 2686 bp。它包含与 pUC19 载体相同的多克隆位点 (MCS)，但排列方向相反了解更多信息

货号	数量
SD0051	50 μg

货号 SD0051

价格（CNY)

455.00

Ends: 31-Dec-2025

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Thermo Scientific pUC18 载体是一种较小的高拷贝数大肠杆菌质粒，长度为 2686 bp。它包含与 pUC19 载体相同的多克隆位点 (MCS)，但排列方向相反。

产品优势

• 采用专有专利技术通过色谱法进行纯化
• 超螺旋形式超过 90%
• 从大肠杆菌 (dam+, dcm+) 中分离得到
• 有关 pUC18 DNA 序列、pUC19 DNA 序列、序列分析和图谱创建，请参见免费在线 REviewer 工具。

应用

• 克隆
• 插入 DNA 测序，pUC18 DNA：制备 DNA 分子量标准品

pUC18/19 质粒内容物和使用注释 - pUC18/19 质粒包含：
• 负责质粒复制的 pMB1 复制子 rep（来源 – 质粒 pBR322）。pUC 质粒的高拷贝数是由于缺少 rop 基因和 pMB1 复制子 rep 中的单点突变所致。
•bla 基因（编码 β-内酰胺酶）可对氨苄青霉素产生耐药性（来源 – 质粒 pBR322）。它与 pBR322 的不同之处在于两个点突变
• 大肠杆菌 lac 操纵子区域，包含 CAP 蛋白结合位点、启动子 P_lac、lac 抑制子结合位点和编码 β-半乳糖苷酶 N 端片段的 lacZ 基因的 5’ 末端部分（来源 – M13mp18/19）。该片段可由 IPTG 诱导合成，能够利用由宿主（突变 delta(lacZ)M15）编码的缺陷形式 β-半乳糖苷酶进行等位基因内 (α) 互补。当存在 IPTG 时，细菌合成酶的这两个片段，并在含有 X-Gal 的培养基上形成蓝色菌落。DNA 插入位于 lacZ 基因内的 MCS（lacZ 的密码子 6-7 被 MCS 取代）中可导致 β-半乳糖苷酶的 N 端片段失活并消除 α 互补。因此，携带重组质粒的细菌会产生白色菌落

图谱显示了对 pUC18 DNA 进行一次切割的酶。由 Thermo Scientific 生产的酶用橙色表示。坐标指的是每个识别序列中第一个核苷酸的位置。

图谱中显示了遗传元件的确切位置（包括终止密码子）。bla 基因核苷酸 2486-2418（互补链）编码一种信号肽。对应于 wt β-半乳糖苷酶且对于蓝白斑筛选必需的 LacZ 多肽在 nt 位置 236 处终止（互补链）。同一读取框架中的另一个 30 密码子来源于 pBR322。指示的 rep 区足以促进复制。DNA 复制在 866 (± 1) 位置启动，并按所示方向进行。携带 pMB1 和 ColE1 复制子的质粒不相容，但它们与携带 p15A 复制子的质粒（pACYC177、pACYC184）完全相容。使用氯霉素可以扩增 pMB1 衍生质粒。

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仅供科研使用。不可用于诊断程序。

克隆方法限制性内切酶/MCS

最大浓度0.5 μg/μL

最终产品类型片段文库、PCR 扩增子、cDNA 文库、寡核苷酸 (DNA)、cDNA

适用于（应用）克隆

产品类型DNA

数量50 μg

样品类型DNA

载体pUC18

Unit Size50 µg

常见问题解答 (FAQ)

转化后没有得到克隆，如何解决这一问题？

无克隆产生的原因可能是出现了下列问题：

•细菌不是感受态细胞。使用包含在One Shot模块内的pUC18载体检查感受态细胞的转化效率。
•平板的抗生素浓度不正确，或者平板过于陈旧。使用100 μg/mL的氨苄青霉素或50 µg/mL的卡那霉素。确保氨苄平板是新鲜的（储存时间小于1个月）。
•产物被磷酸化了（仅针对TOPO克隆而言）。磷酸化的产物可以进行TA-克隆但不能进行TOPO-克隆。这是因为连接所需的磷酸基团已经包含在载体DNA和拓扑异构酶-形成的中间体复合物中了。TOPO载体含有一个与拓扑异构酶共价结合的3' 磷酸基团和一个5'磷酸基团。非TOPO载体（TA和Blunt）含有一个3' OH基团和一个5'磷酸基团。磷酸化产物在进行TOPO-克隆之前应该用磷酸酶（CIP）处理。

I'm getting no colonies after transformation. What should I do?

No colonies may occur due to the following problems:

Bacteria were not competent. Use the pUC18 vector included with the One Shot module to check the transformation efficiency of the cells.
- Incorrect concentration of antibiotic on plates, or the plates are too old. Use 100 µg/mL of ampicillin or 50 µg/mL kanamycin. Be sure ampicillin plates are fresh (< 1 month old).
- The product was phosphorylated (TOPO cloning only). Phosphorylated products can be TA-cloned but not TOPO-cloned. This is because the necessary phosphate group is contained within the topoisomerase-DNA intermediate complex of the vector. The TOPO vector has a 3' phosphate to which topoisomerase is covalently bound and a 5' phosphate. The non- TOPO vectors (TA and Blunt) have a 3' OH and a 5' phosphate. Phosphorylated products should be phosphatased (CIP) before TOPO-cloning.