用于流式细胞分析的 Vybrant™ FLICA 半胱天冬酶细胞凋亡检测试剂盒

使用适用于多聚半胱天冬酶以及半胱天冬酶 3 和 7 的 Vybrant FAM 半胱天冬酶检测试剂盒，通过流式细胞分析，快速检测半胱天冬酶介导的细胞凋亡。Vybrant FAM 半胱天冬酶检测试剂盒使用荧光半胱天冬酶抑制剂 (FLICA) 方法，用于检测和报告半胱天冬酶活性。具体而言，这些半胱天冬酶检测试剂盒包含经工程改造的 FLICA 底物 FAM-VAD-FMK（用于多聚半胱天冬酶）、FAM-DEVD-FMK（用于半胱天冬酶-3/7）和 FAM-LETD-FMK（用于半胱天冬酶-8）。它们还包括 Hoechst 33342 和碘化丙啶染色剂，能够通过流式细胞分析同时评估膜可透过性和细胞周期。

用于流式细胞分析的 Vybrant FAM 半胱天冬酶检测试剂盒采用了一种检测活性半胱天冬酶的新方法：该试剂盒利用 FLICA 方法（亲和标记）。该亲和标记将一个可以与半胱氨酸发生共价反应的氟甲基酮 (FMK) 部分和一个半胱天冬酶特异性氨基酸序列相连接。不同的氨基酸识别序列用于检测不同的半胱天冬酶：缬氨酸-丙氨酸-天冬氨酸 (VAD) 用于检测多聚半胱天冬酶（包括半胱天冬酶-1、-3、-4、-5、-6、-7、-8 和 -9），天冬氨酸-谷氨酸-缬氨酸-天冬氨酸 (DEVD) 用于检测半胱天冬酶-3/7，亮氨酸-谷氨酸-苏氨酸-天冬氨酸 (LETD) 用于检测半胱天冬酶-8。连有一个羧基荧光素 (FAM) 基团，作为报告基团。

FLICA 试剂与已激活半胱天冬酶的反应中心通过识别序列相互作用，之后通过 FMK 基团与半胱氨酸共价连接。FLICA 抑制剂具有细胞渗透性但没有细胞毒性。未结合的 FLICA 分子扩散出细胞并被洗涤掉，其余的荧光信号可用于直接测定加入抑制剂时存在的活性半胱天冬酶的量。FLICA、碘化丙啶和 Hoechst 33342 试剂的近似激发峰和发射峰分别为 488 nm/⁄530 nm、535⁄ nm/6617 nm 和 350 nm/⁄461 nm。Vybrant FAM 多聚半胱天冬酶检测、半胱天冬酶-3 和半胱天冬酶-7 检测以及半胱天冬酶-8 检测细胞凋亡试剂盒中包括的检测试剂分别为 488⁄⁄530 FAM-VAD-FMK 试剂、488/⁄530 FAM-DEVD-FMK 和 488/⁄530 FAM-LETD-FMK。