Pierce™ 磁性 RNA-蛋白 Pull-Down 试剂盒
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Pierce™ 磁性 RNA-蛋白 Pull-Down 试剂盒
Thermo Scientific™

Pierce™ 磁性 RNA-蛋白 Pull-Down 试剂盒

Thermo Scientific Pierce 磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒为研究人员提供了一种简化、稳健的方法,使用末端标记 RNA 作为诱饵来富集蛋白-RNA 相互作用。磁性了解更多信息
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201641 个试剂盒
货号 20164
价格(CNY)
6,840.00
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Ends: 31-Dec-2025
8,678.00
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Thermo Scientific Pierce 磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒为研究人员提供了一种简化、稳健的方法,使用末端标记 RNA 作为诱饵来富集蛋白-RNA 相互作用。

磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒的特点:

直接 – 使用末端标记 RNA 直接捕获核糖核蛋白复合物;沉降时不使用或不需要抗体
易于使用– 富集 RBP 时不需要使用离心杯或离心;简化了程序,完成 RNA 标记反应后仅需极少的手动操作时间(小于 3 小时)
灵活– 使用体外转录 RNA 或合成 RNA 进行各种长度和复杂性的标记;使用内源性、过表达和体外翻译裂解物成功富集的蛋白
特异性– 磁珠背景噪音低;无关 RNA 或突变 RNA 不会显著影响特定 RBP 的富集
经济– 价格低于单独购买商业合成的末端标记 RNA、磁珠和试剂
全套– 含有标记模块和富集模块,模块中带有检测所需的缓冲液;包括阳性对照 RNA、阴性对照 RNA 以及 RBP 抗体

磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒提供了使用以脱硫生物素末端标记的 RNA 高效富集 RNA 结合蛋白 (RBP) 的试剂以及链霉素亲和素磁珠。全套试剂盒中包含的试剂足够进行 20 次 RNA 标记反应和 20 次蛋白-RNA 沉降分析。这种直接富集蛋白-RNA 相互作用的方法可以替代蛋白-RNA 复合体或核酸嵌入蛋白的抗体捕获法。本试剂盒的另一个优点是,它为标记反应和沉降分析均提供了经验证的质控品。该试剂盒适于进行多种下游应用,包括 Western 印迹和质谱 (MS)。

包括:
全套试剂盒中包含 Pierce RNA 3'-端脱硫生物素化试剂盒、阳性和阴性 RNA 对照品、核酸兼容性链霉素亲和素磁珠以及 RBP 富集和洗脱缓冲液

需要:
用户提供的 RNA 和裂解物(实验样品)

应用:
• 突变分析
• 结构功能分析
• RNA 与蛋白相互作用的鉴别
• 未知 RNA:蛋白结合对或复合物的 MS 分析

使用标记 RNA 作为诱饵来富集 RNA-结合蛋白优于抗体富集,因为其直接捕获相互作用。本试剂盒中包括 Pierce RNA 3'-末端脱硫生物素化试剂盒,其使用 T4 RNA 连接酶将单个胞苷二磷酸核苷酸连接至单链 RNA 的 3'-末端。脱硫生物素既可用作检测靶标,也可用作可洗脱亲和柄。核苷酸与脱硫生物素之间的间隔臂长度已经过优化处理,可高效连接至微珠上,而不会阻碍 RNA 与蛋白的结合。

RNA 结合蛋白富集的程序已经过优化,易于使用。先将标记好的 RNA 捕获到微珠上,以作好结合蛋白的准备。将结合了 RNA 的微珠放入蛋白 RNA 结合缓冲液中进行平衡,然后加入蛋白裂解物。洗涤之后,使用非变性生物素洗脱缓冲液或 SDS-PAGE 上样缓冲液洗脱样品。洗脱后的样品即可进行各种下游操作,包括 Western 印迹或质谱分析。

沉降检测的控制系统包括雄激素受体 (AR) RNA 的 3'-非翻译区、poly(A)25 RNA 以及哺乳动物细胞裂解物。雄激素受体 RNA 的近端 3'-非翻译区 (UTR) 中包含多个富含 UC 的区域,可结合 HuR 以及 Poly(C) 结合蛋白质(CP1 和 CP2)。这些 RNA 结合蛋白可调节 mRNA 的稳定性 (HuR) 以及 mRNA 的代谢和翻译(CP1 和 CP2)。阴性对照 RNA 和 poly(A)25 RNA 中并不包含 HuR 或 poly(C) BP 的结合位点。

相关产品
Pierce™ 磁性 RNA-蛋白沉降试剂盒
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
产品规格试剂盒
套装内容50 pmol of RNA per Reaction
数量1 个试剂盒
足够用于20 次反应
容量(公制)50 pmol RNA/反应
产品线Pierce™
类型RNA-蛋白沉降试剂盒
Unit SizeEach
内容与储存
足够用于:20 次 RNA-蛋白复合物沉降反应
• Pierce 核酸兼容链霉素亲和素磁珠,1 mL(在 4°C 下储存)
• RNA 捕获缓冲液 (1X),10 mL(在 4°C 下储存)
• Tris(20 mM,pH 值 7.5),5 mL(在 4°C 下储存)
• 蛋白-RNA 结合缓冲液 (10X),1 mL(在 4°C 下储存)
• 洗涤缓冲液 (1X),10 mL(在 4°C 下储存)
• 生物素洗脱缓冲液,1.5 mL(在 4°C 下储存)
• HuR 单克隆抗体(小鼠),50 µL(在 4°C 下储存)
• 阳性 RNA 对照品 (AR RNA),250 pmol(在-20°C 下储存)
• 阴性 RNA 对照品 (polyA25 RNA),250 pmol(在-20°C 下储存)
• Pierce RNA 3' 末端脱硫生物素化试剂盒(产品编号 20163;在-20°C 下储存)

常见问题解答 (FAQ)

Can I use Coomassie or silver staining to detect proteins isolated with the Pierce Magnetic RNA-Protein Pull-Down Kit (Cat. No. 20164)?

Proteins isolated with the Magnetic RNA-Protein Pull-Down Kit cannot be detected by Coomassie or silver staining. Gels can be used for detection depending on the amount of total protein used in the experiment. If the protein of interest has an antibody available, it can usually be detected via western blotting. Finally, if the protein isolated is unknown, it can be analyzed by mass spectrometry.

After using the Magnetic RNA-Protein Pull-Down Kit, I would like to analyze my elution fraction by mass spectrometry (MS). How can I do this?

The elution fraction is compatible with preparation of peptides. Samples may be processed using the Mass Spec Sample Prep Kit for Cultured Cells (Cat. No. 89840). Alternatively, the elution fraction may be separated by denaturing PAGE. Bands of interest can be excised, and digested using the In-Gel Tryptic Digestion Kit (Cat. No. 89871).

I am using the Magnetic RNA-Protein Pull-Down Kit and am getting a low signal on my western blot. What is the problem?

Here are the possible causes and solutions:

- Insufficient signal: Increase amount of secondary antibody; Use a more sensitive chemiluminescent detection (e.g., SuperSignal Dura or SuperSignal Femto Chemiluminescent Substrate).
- Poor antibody quality: Pre-screen antibody with cell lysate; Include cell lysate as a control on western blot.
- Protein was insufficient in lysate: Increase amount of sample; Identify alternate source of protein; Use a more concentrated lysate.

With the Magnetic RNA-Protein Pull-Down Kit, I am getting high non-specific binding of the RNA-binding protein. Why is this?

Here are possible causes and solutions:

- Binding reaction was not optimized: Optimize incubation time, temperature, salt and detergent for binding reactions.
- Insufficient washing stringency: Increase stringency of wash buffer; add salt and/or detergent.
- Ratio of labeled RNA to lysate was not optimized: Titrate labeled RNA with protein lysate; Reduce the concentration of lysate to ~2mg/mL.

I got no recovery of the RNA-binding protein when I used the Magnetic RNA-Protein Pull-down Kit. What should I do?

Here are possible causes and solutions:

- Insufficient amount of target protein in the sample: Increase amount of sample.
- Sample was not compatible with the binding reaction: Buffer exchange sample using Zeba Desalting Columns.
- Binding reaction was not optimized: Optimize incubation time, temperature, salt and detergent for binding reactions; Titrate amount of labeled RNA to protein lysate; Use a more concentrated lysate.
- RNA binding protein had low affinity for labeled RNA: Add crosslinking reagent (e.g., UV, etc.) after protein has bound RNA.