Sequenase 版本 2.0 DNA 聚合酶

说明：
Sequenase™ 版本 2.0 DNA 聚合酶是基因工程改造形式的 T7 DNA 聚合酶。与野生型酶不同，它几乎没有 3'→5' 核酸外切酶活性。Sequenase 版本 2.0 具有高度持续性，包含核苷类似物（dlTP、硫代-dNTP、双脱氧-NTP 等），不会受阻于二级结构，并可进行链置换合成。该酶可出色用于双脱氧测序，在其他应用中也很有帮助，尤其适合不存在相关核酸外切酶活性的情况。

Sequenase 版本 2.0 有两个亚单元，一个是大肠杆菌硫氧还蛋白 (MW 12,000)，另一个是噬菌体 T7 基因 5 蛋白 (MW 76,000) 的基因工程改造版本。该亚单元发生的基因改变（通过体外突变删除 28 个氨基酸）清除了所有可测量的核酸外切酶活性，但不会改变 DNA 聚合酶的活性。

特性：
分子量：包括两个亚单元，经修饰的 T7 基因 5 蛋白 (76 kDa) 和大肠杆菌
硫氧还蛋白 (12 kDa)
极佳 pH 值：7.5
极佳温度：37°C
二价阳离子要求：Mg2⁺、Mn2⁺

纯度：
通过 SDS-PAGE 测得纯度大于 95%。针对污染性双链和单链核酸内切酶和核酸外切酶进行了检测。

储存缓冲液：
20 mM 磷酸钾（pH 值 7.4）、1 mM DTT、0.1 mM EDTA、50% 甘油。

检测条件：
反应混合物 (100 µL) 包含 40 mM Tris-HCl（pH 值 7.5）、10 mM MgCl₂、5 mM DTT、0.3 mM dNTP 和 5 µg M13mp18（预退火至 5 pmol M13 通用型引物）。将酶添加至预热 (37°C) 的反应混合物中；37°C 下孵育 1 分钟。

单位定义：
一个单位的酶可在 37°C 下于 30 秒内催化 1 nmol 核苷酸至不溶性酸的掺入过程。

浓度：
13 个单位/µL

Sequenase 稀释缓冲液（随附 1 mL，PN 70765）：
10 mM Tris-HCl（pH 值 7.5）、5 mM DTT、0.1 mM EDTA。

参考文献：
Tabor, S. and Richardson, C. C. (1989) J. Biol.Chem.264, 6447-6458.
Wang, D., Coscoy, L., Zylberberg, M., Avila, P. C., Boushey, H. A., Ganem, D. and DeRisi, J. L. (2002) Proc Natl.Acad.Sci.USA, 99, 15687-15692.
Paris, M. (1992) Comments 18, (No. 3), United States Biochemical Corporation, Cleveland, Ohio.
Tabor, S. and Richardson, C. C. (1987) Proc.Natl.Acad Sci.USA84, 4767-4771.
Tabor, S. and Richardson, C. C. (1989) Proc.Natl.Acad.Sci.USA86, 4076-4080.