Alexa Fluor™ 546 C₅ 马来酰亚胺

Alexa Fluor™ 546 是一种明亮的橙色荧光染料，可使用 488 nm 或 532 nm 激光谱线激发。Alexa Fluor™ 546 染料用于成像和流式细胞分析中稳定信号的生成，具有水溶性和 pH 值不敏感性（pH 值 4 至 pH 值 10）。除反应性染料制剂外，我们还提供可与多种抗体、肽、蛋白、示踪剂和扩增底物偶联并且针对细胞标记和检测进行优化的 Alexa Fluor™ 546 染料（了解更多信息）。

Alexa Fluor™ 546 的马来酰亚胺衍生物是将该染料与蛋白、寡核苷酸硫代磷酸盐或低分子量配体上的硫醇基团偶联的较常用工具。所得 Alexa Fluor™ 546 偶联物显示出比其他光谱相似荧光基团的偶联物更亮的荧光和更高的光稳定性。

关于该 AlexaFluor™ 马来酰亚胺的详细信息：

荧光基团标记：Alexa Fluor™ 546 染料
反应性基团：马来酰亚胺
反应性：蛋白质和配基上的硫醇基团、寡核苷酸硫代磷酸盐
偶联物的 Ex/Em：554/570 nm
消光系数：93,000 cm-1M-1
光谱类似染料：罗丹明红，Cy3
分子量：1034.37

典型偶联反应
在适当的缓冲液中，在 pH 值 7.0-7.5 下该蛋白浓度应为 50-100 µM（10-100 mM 磷酸盐、Tris 或 HEPES）。在此 pH 值范围内，蛋白硫醇基团亲核性强，在存在不计其数的蛋白胺（这些蛋白胺经过质子化，并且相对不具反应性）时，几乎仅与试剂反应。我们建议此时使用达到 DTT 或 TCEP 等还原剂摩尔量10倍的浓度还原所有二硫键。必须通过透析去除过量的 DTT，应在无氧条件下进行后续硫醇修饰，以防止二硫键再形成；在马来酰亚胺偶联之前使用 TCEP 时，无需采取这些预防措施。

Alexa Fluor™ 马来酰亚胺通常在即将使用前溶于高质量无水二甲亚砜 (DMSO) 中，浓度为1-10 mM，储备液应尽可能避光储存。通常，将这种储备液逐滴加入蛋白溶液中，同时搅拌，产生大约10-20摩尔试剂/摩尔蛋白，反应在室温下进行2小时，或在 4°C 下过夜避光进行。通过添加过量的谷胱甘肽、巯基乙醇或其他可溶性低分子量硫醇，可以消耗任何未反应的硫醇反应性试剂。

偶联物纯化
通常使用凝胶过滤柱（如 Sephadex™ G-25、BioGel™ P-30 或等效物）将标记抗体与游离 Alexa Fluor™ 染料分离。对于更大或更小的蛋白，选择具有适当分子量滤除点的凝胶过滤介质或通过透析纯化。我们提供了多种优化的纯化试剂盒，可用于不同量抗体偶联物：
0.5-1 mg 用抗体偶联物纯化试剂盒 (A33086)
20-50 µg 用抗体偶联物纯化试剂盒 (A33087)
50-100 µg 用抗体偶联物纯化试剂盒 (A33088)

了解关于蛋白和抗体标记的更多信息
我们提供一系列 Molecular Probes™ 抗体和蛋白标记试剂盒，旨在满足您的起始材料和实验设置需求。参见我们的抗体标记试剂盒或使用我们的标记化学选择工具进行其他选择。欲了解有关我们标记试剂盒的更多信息，请参阅 Molecular Probes™ 手册中第 1.2 节—蛋白和核酸标记试剂盒。

我们还’可为您定制偶联物
如果您’无法在我们的在线目录中找到’想要的产品，我们还’可为您定制抗体或蛋白偶联物。我们的定制偶联服务是高效和保密的，我们保证我们的工作质量。我们经过ISO 9001:2000认证。