ViraPower™ HiPerform™ Promoterless Gateway™ 载体试剂盒

如果转染后不久（4小时至过夜）293FT细胞就从平板上脱离下来：
•这可能是Lipofectamine 2000的毒性所致。可能在转染前细胞种植密度过低。
•用户对这些细胞的操作可能不够轻柔（这些细胞有易于漂浮的倾向）。
•这些细胞可能在室温条件下放置时间过长。

如果在转染48-72小时的时间段内细胞脱离：
•如果细胞大片脱离，这可能是慢病毒产生的一个标志。

合胞体是由相邻的293FT细胞通过VSV-G诱导的融合效应所形成的大型多核细胞。合胞体的产生是获得高转染效率和慢病毒生成效果的一个表征。不过请记得，未产生合胞体并不意味着病毒没有生成。

293FT细胞系稳定表达源自pCMVSPORT6Tag.neo质粒的SV40大T抗原，该载体中同时也包含了新霉素抗性标志物。为了保持质粒的存在和表型的正常，细胞需要常规培养于含有500 μg/mL浓度Geneticin（G418）抗性的培养基中。

我们使用经测试不含支原体的Gibco FBS（货号 16000-044）。我们发现，如果按照产品手册中的说明以这款FBS培养293FT细胞时，病毒生成效率要比使用其他来源的血清更高。我们使用以下塑料器皿来培养293FT细胞：

T175—Fisher 货号 10-126-13；这是一款Falcon培养瓶，带有0.2 μm透气塞的密封盖。
T75—Fisher 货号 07-200-68；这是一款Costar培养瓶，带有0.2 μm透气塞的密封盖。
100 mm 平板—Fisher 货号 08-772E；这是一款针对组织培养应用进行预先处理的的Falcon聚苯乙烯平板。

在常规细胞培育条件下，我们应用这些平板获得了绝佳的细胞粘附效果。

我们提供ViraPower HiPerform 无启动子（Promoterless）Gateway表达系统（货号A11145），该产品整合了ViraPower HiPerform 慢病毒技术和MultiSite Gateway技术，能够为用户提供便利的重组克隆操作和目的基因高水平的慢病毒表达，适用于分裂与非分裂哺乳动物细胞，并可由用户自己选择任意类型的启动子。ViraPower HiPerform Promoterless Gateway载体试剂盒可单独购买（货号A11146）。