Jump-In™ CHO-K1 试剂盒

我们推荐您在用于建立平台细胞系的质粒中加入一个表达标志物/报告基因，之后通过该标志物的表达情况来筛选平台细胞系，以鉴定出一个高表达位点。否则，这一过程会非常繁琐，重定位后需要筛选大量的克隆。

pJTI Phic31 Int载体不含NLS信号。加入NLS信号可能会增加假attP位点的特异性整合效率，但尚未获得支持数据。有一篇文献描述了在PhiC31整合酶载体上NLS信号的应用，但作者未检测假attP位点的整合情况。

获得单拷贝所需的DNA用量可能要通过不含整合酶的对照试验来确定。在不含整合酶的条件下，生成低于5个克隆时的DNA用量可用于后续含整合酶的实验。一般来说，整合酶表达质粒占转染所需DNA量的大部分。

如果您需要稳定的哺乳动物表达效果，并希望快速获得良好表达的克隆时，我们推荐您使用Jump-In Fast系统。您可通过PhiC31 假（pseudo）-att P位点上的一次或多次整合来获得良好表达的细胞克隆。用户有必要使用Southern杂交来确定整合的数目。如果您需要完成同基因的表达操作，则可选择Jump-In TI系统，这一系统可以确保所有的克隆基因都处于同一整合位点和背景水平，而不会出现染色体位置效应。

Jump-In系统是由PhiC31-整合酶所介导的一个不可逆转的哺乳动物稳定定向表达系统。这一系统是由Jump-In Fast系统和Jump-In TI（定向整合）系统所组成，前者包含了单一的整合步骤，后者则需要两个整合步骤，两者都是定向且不可逆的。相比而言，Flp-In系统是一款可逆和稳定的哺乳动物靶向表达系统。第一步整合是随机的（pFRT/lacZeo的整合），而第二步整合（Flp-In表达载体的整合）是定向但可逆的。