GeneArt™ 蓝细菌聚球藻属蛋白表达载体
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GeneArt™ 蓝细菌聚球藻属蛋白表达载体

GeneArt™蓝细菌聚球藻属蛋白表达载体是第二代蓝细菌聚球藻属蛋白表达载体,针对藻类中相对高水平的表达进行了优化,以及其双蛋白标记可针对目标基因进行检测和/或纯化。该试剂盒包含表达载体和易于遵守的方案。Gibco™ BG-11 培养基单独出售,其经过优化可用于选定蓝藻(包括获取自 ATCC 保藏中心的细长聚球藻)的生长和维持。•表达了解更多信息
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GeneArt™蓝细菌聚球藻属蛋白表达载体是第二代蓝细菌聚球藻属蛋白表达载体,针对藻类中相对高水平的表达进行了优化,以及其双蛋白标记可针对目标基因进行检测和/或纯化。该试剂盒包含表达载体和易于遵守的方案。Gibco™ BG-11 培养基单独出售,其经过优化可用于选定蓝藻(包括获取自 ATCC 保藏中心的细长聚球藻)的生长和维持。

•表达 >10% 目标基因总可溶性蛋白
• 采用 6His-TEV 和/或 V5-His 抗原决定簇标签检测和纯化目标基因
• 与无缝组装兼容,用于构建体创建

特异性决定表达载体
GeneArt 蓝细菌聚球藻属蛋白表达载体设计用于提供细长聚球藻组成型表达。表达由启动子 psbA1、核糖体结合位点 (RBS) 以及可选的起始和终止密码子控制,具体取决于基因位置。该载体在 N 和 C 端提供了纯化和检测标签:N 端多聚组氨酸标签与 TEV 识别位点(能够进行可选的切割)以及 C 端 V5 抗原决定簇(后接多聚组氨酸标签)。两个 MCS 位点提供了将一种、两种或不将标记附加至蛋白的灵活性。pSyn_6 载体还可与无缝克隆兼容,这是一种可选的克隆方法,该方法产生的最终构建体中不会产生额外序列。

载体的特点包括:
•强大的组成型启动子 psbA1,用于稳健表达目标重组基因
• 改进部分基因表达的核糖体结合位点 (RBS)
• 目标基因靶向整合至细长聚球藻基因组
• N 端 6His-TEV 和 C 端 V5-6His 抗原决定簇标签
• 壮观霉素抗性基因选择用于蓝细菌聚球藻属
• 灵活、多克隆位点载体

>80% 整合效率
细长聚球藻 PCC7942 的转化依赖于细胞染色体与外源性 DNA 之间的同源重组,其不能自动复制并包含与染色体同源的序列。整合到染色体中的位置(中性位点,NS1)是作为克隆位点开发的,因为它可以在没有畸变表型的情况下被破坏,因此允许重组异位序列。当采用含有抗生素耐药性盒和中性位点序列的载体进行转化时,在中性位点载体和细长集球藻染色体之间出现双同源重组事件。将选择性标记(大观霉素)和由启动子驱动的目标基因插入到中性位点,载体骨架 (pUC) 丢失,允许细长聚球藻 PCC 7942 表达重组基因

Gibco BG-11 培养基—经优化适用于蓝藻
Gibco BG-11 培养基(单独提供)经优化适用于选定蓝藻(包括细长聚球藻)的生长和维持。1X 配方使您避免了繁琐的培养基制备步骤。获奖的瓶设计更容易在生物安全柜中使用,尽可能降低污染风险,并帮助您更一致地开展细胞培养。出色的包装和质量,更高的可靠性和改进的蓝藻培养一致性,可获得更高的整体效率和更稳定的数据。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
产品类型蛋白表达载体
数量10 reactions
运输条件干冰
产品线GeneArt
Unit SizeEach

常见问题解答 (FAQ)

pSyn_1与pSyn_6有何区别?

pSyn_1的启动子是Psc。Psc是一种弱组成型启动子,可启动目的基因的本底表达。该启动子来自集胞藻PCC6803的茄呢酰二磷酸酯合酶基因。注意:该弱组成型启动子适用于受强表达阻碍的应用,如通路基因工程或低水平表达型突变基因的互补作用(Simkovsky et al., 2012)。

pSyn_6的启动子是psbA启动子(PpsbA)。PpsbA是细长聚球藻psbA基因(编码光合系统II蛋白D1)的一种强组成型启动子,可启动目的基因的高水平表达。pSyn-6载体还包括一个用于有效起始翻译的核糖体结合位点(GAAGGAG)和一个终止密码子。载体骨架还包含一个6xHis TEV和一个V5-His附加表位,用于检测/纯化目的基因。两种载体都含有NS1(中性位点1)同源重组位点,用于将载体整合到细长聚球藻基因组中。

使用聚球藻表达试剂盒进行整合的原理是什么?

在基因组中性位点1(Neutral Site 1)之间和质粒的NSa和NSb之间发生双重同源重组事件,从而将目的基因和壮观美素抗性整合到中性位点1内的基因组中。

我想通过非随机整合建立稳定的藻类。你们推荐使用哪种试剂盒?

推荐使用我们的Synechococcus试剂盒,其整合是针对藻类基因组的中性位点1(Neutral Site 1)。

What is the difference between pSyn_1 and pSyn_6?

The promoter for pSyn_1 is the Psc. Psc is a weak constitutive promoter that drives basal expression of your gene of interest. The promoter was taken from the solanesyl diphosphate synthase gene from Synechocystis sp. Strain PCC 6803. Note: Use of this weak constitutive promoter is a good fit for applications that are hindered by strong expression, such as pathway engineering or complementation of mutant genes normally expressed at low levels (Simkovsky et al., 2012).

The promoter for pSyn_6 is the psbA promoter (PpsbA). PpsbA is a strong constitutive promoter of the psbA gene (encoding photosystem II protein D1) from Synechococcus elongatus, driving high-level expression of your gene of interest. The pSyn-6 vector also includes a ribosome-binding site (GAAGGAG) for efficient initiation of translation, as well as a stop codon. A 6xHis TEV and a V5-His epitope tag is also included in the vector backbone for detection/purification of the gene of interest. NS1 (neutral site 1) homologous recombination sites are present in both vectors for the integration of the vector into the Synechococcus elongatus genome.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

What is the mechanism of integration when using the Synechococcus expression kits?

A double homologous recombination event occurs between the Neutral Site 1 in the genome and between NSa and NSb in the plasmid. This results in the gene of interest and spectinomycin resistance integrating into the genome within the Neutral Site 1.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.