GeneArt™ 衣藻蛋白表达载体

GeneArt™衣藻蛋白表达载体是我们的第二代衣藻蛋白表达载体，用于真核生物绿藻莱茵衣藻 137c 细胞核基因组的转基因表达。经优化可获得相对高水平的表达，提供抗性基因以对抗基因沉默，以及其双蛋白标签可针对目的基因的表达进行检测和/或纯化。该试剂盒包含表达载体和易于遵守的方案。Gibco™ TAP 培养基单独出售，经过优化可用于衣藻的生长和维持。莱茵衣藻 137c 可从衣藻资源中心获得。

•在总的可溶性蛋白中，目的基因的表达量可高达 1%
•通过抗性筛选，即使经过多次传代也可避免基因沉默
•可用 6His-TEV 和/或 V5-His 抗原决定簇标签对目的基因的表达进行检测和纯化
•与无缝组装系统兼容，可用于创建构建体
•通过优异的藻株活力和纯度获得可靠结果

衣藻 pChlamy_4 载体
通过衣藻细胞核基因组进行转基因表达，与叶绿体表达相比，在翻译后修饰和蛋白靶向和/或分泌等方面具有多种优势。然而，细胞核基因组的表达通常不是很稳健，而且表达不良的分子机制尚不完全清楚。可能的原因包括启动子较弱、基因组整合位点效应和转基因沉默。GeneArt 衣藻蛋白表达载体提供相对较高水平的表达蛋白和抗沉默选择。pChlamy_4 载体还可与无缝克隆兼容，这是一种可选的克隆方法，该方法产生的最终构建体中不会产生额外序列。

载体的特点包括：
•内源性和组成型启动子 Hsp70A-RbcS2 由激活子 Hsp70A 和两拷贝 RBC S2 内含子序列组成，可增强目的基因的表达
• Hsp70A-Rbc S2 杂合启动子与博来霉素/Zeocin™ 抗性基因融合，可使阳性转化体的蛋白表达水平维持多代
•来自口蹄疫病毒 (FMDV) 的 2A 肽自剪切序列可介导抗性标志物与目的蛋白之间的正确剪切，得到两个独立蛋白
• 3’ UTR 可确保正确转录终止并具有可能的额外获益，如翻译效率、mRNA 稳定性和聚腺苷酸化信号提高
•双蛋白标签 6His-TEV 和 V5-His 抗原决定簇可与目的基因的一端或两端融合，或选择完全不加标签

加压选择避免基因沉默
为了避免莱茵衣藻中常出现的转基因沉默，我们全新的 pChlamy_4 载体经过了专门设计，蛋白会与博来霉素/zeocin 抗性基因 sh-ble 作为融合转录本进行表达。来自口蹄疫病毒 (FMDV) 的 2A 肽自剪切序列位于抗生素抗性基因和目的基因之间。它编码一个短的 ∼20 个氨基酸序列，介导正确剪切产生两个独立的蛋白。相比其他系统，使用该系统我们可观察到阳性转化体可维持更长时间的高表达水平，即使在存在或不存在选择压力情况下经数次传代仍可维持。

藻类的极高效率转化试剂
衣藻研究和开发中的最大障碍之一是将外源 DNA 引入衣藻藻株，因为细胞壁较硬。