GeneArt™ 基因组剪切检测试剂盒

引用和文献 (7)

Invitrogen™

GeneArt™ 基因组剪切检测试剂盒

GeneArt 基因组剪切检测试剂盒是一种快速的、基于 T7核酸内切酶方法的产品，该试剂盒可用于量化您的基因组编辑实验方案在您细胞系的基因组中所致的插入和缺失（插入缺失）情况。这是细胞工程实验中用于量化和校验最佳 CRISPR-Cas9 gRNA 或最佳了解更多信息

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A24372	20 reactions

货号 A24372

价格（CNY)

2,699.00

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20 reactions

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GeneArt 基因组剪切检测试剂盒是一种快速的、基于 T7核酸内切酶方法的产品，该试剂盒可用于量化您的基因组编辑实验方案在您细胞系的基因组中所致的插入和缺失（插入缺失）情况。这是细胞工程实验中用于量化和校验最佳 CRISPR-Cas9 gRNA 或最佳 TAL 效应物核酸酶的最快方法。GeneArt 基因组剪切检测试剂盒提供了便利、快速而完整的解决方案。

利用这种基于 T7核酸内切酶 I (T7EI) 的方法，您可以快速安心地测量非同源末端连接 (NHEJ) 活性所产生的靶向基因组编辑效率。GeneArt 基因组剪切检测试剂盒的优势如下：

• 实操时间极短 - 使用细胞裂解液进行 PCR 扩增，无需进行 DNA 纯化
• 短期实验方案 - 从获得细胞到量化结果仅需四小时
•仅需添加 PCR 引物 - 一盒囊括一切所需用品。无需单独购买 PCR 预混液或 DNA 提取试剂盒。
• 直接从凝胶中量化编辑效率 - 凝胶带密度与形成靶向插入缺失具有直接相关性

无需苦等测序结果或进行复杂的测序分析，检测当天即可获得结果。

仅供科研使用。不可用于诊断程序。

产品规格试剂盒

反应次数20 次反应

聚合酶Taq 聚合酶

产品类型基因组切割检测试剂盒

数量20 reactions

识别部位INDEL

足够用于20 次反应

技术CRISPR-Cas9、TAL 效应物核酸酶

检测方法引物-探针

反应速度快速

Unit SizeEach

内容与储存

包含：

•1瓶细胞裂解缓冲液
• 1管蛋白酶 K
• 1管 PCR 超混液
• 1管水
• 1管 T7E1 检测酶
• 1管 T7E1 检测反应缓冲液
• 1管对照模板和引物

在 -5° 至 -30°C 下储存所有成分。

常见问题解答 (FAQ)

什么是TALs或TALENs？

TALs或者TALENs是类似于转录激活因子的效应核酸酶蛋白，它们是天然存在的转录激活因子，由Xanthomonas spp.分泌到其植物宿主体内。 Invitrogen GeneArt TALs来源于细菌Xathomonas产生的TAL效应子，其DNA结合结构域包含不同数目的氨基酸重复序列。每个重复包含33-35个氨基酸并可识别一个单DNA碱基对。对DNA的识别是通过两个高变异氨基酸残基实现的，它们分别位于每个重复序列的第12和13位，被称为重复可变双残基（repeat-variable di-residues, RVD）。TAL效应子重复序列可以通过模块的形式组装，通过改变RVD而生成一个识别特定目标DNA序列的TAL蛋白。

我想要整合一个你们没有提供的效应子结构域，该如何处理？

我们在TAL MCS入门载体中提供一个多克隆位点替代效应子结构域。这一设计使得您可以向其中插入任何蛋白编码序列，并且可以根据序列特异性将您得到的TAL蛋白靶向到基因组的任何位置。我们还提供基因合成服务以生成任何您没有模板的效应子结构域。

我正试图设计我的TAL但是在TAL效应子5’末端没有一个T，该如何处理？

虽然我们的Invitrogen GeneArt Precision TALs要求在5’末端有一个T并且在正向和反向TAL效应子之间有13–18 bp的间隔序列以便Fok1核酸酶进行正常配对，但是Invitrogen GeneArt PerfectMatch TALs允许靶向基因组任何序列并且消除了5’末端要求为T的限制。另外，两个效应子之间的最佳间隔序列为 15–16 bp。

结合结构域可以是19或25 bp。哪种长度效果更好呢？

19 bp结合结构域对于核酸酶而言效果更好。结合位点不需要是相同长度；但是对于核酸酶而言19 bp结合结构域效果最好。

我希望使用一组TALs敲除两个基因。我已经找出了可能的结合位点，但是我找不到两个基因之间100%同源的位点。如果在结合结构域有1或2 bp的错配的话TAL将如何工作？这种情况TAL仍然能起作用吗？

我们观察到只要有3 bp的错配便会影响TAL的结合。我们建议设计序列和结合位点之间精确匹配。如果您需要获得设计上的帮助，请发邮件到geneartsupport@lifetech.com.

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引用和文献 (7)

引用和文献

Abstract

CRISPR/Cas9-Mediated Genomic Deletion of the Beta-1, 4 N-acetylgalactosaminyltransferase 1 Gene in Murine P19 Embryonal Carcinoma Cells Results in Low Sensitivity to Botulinum Neurotoxin Type C.

Authors:Tsukamoto K, Ozeki C, Kohda T, Tsuji T,

Journal:

PubMed ID:26177297

'Botulinum neurotoxins produced by Clostridium botulinum cause flaccid paralysis by inhibiting neurotransmitter release at peripheral nerve terminals. Previously, we found that neurons derived from the murine P19 embryonal carcinoma cell line exhibited high sensitivity to botulinum neurotoxin type C. In order to prove the utility of P19 cells for the ... More

Rapid and highly efficient mammalian cell engineering via Cas9 protein transfection.

Authors:Liang X, Potter J, Kumar S, Zou Y, Quintanilla R, Sridharan M, Carte J, Chen W, Roark N, Ranganathan S, Ravinder N, Chesnut JD,

Journal:

PubMed ID:26003884

'CRISPR-Cas9 systems provide a platform for high efficiency genome editing that are enabling innovative applications of mammalian cell engineering. However, the delivery of Cas9 and synthesis of guide RNA (gRNA) remain as steps that can limit overall efficiency and ease of use. Here we describe methods for rapid synthesis of ... More

Multiplex genome engineering in human cells using all-in-one CRISPR/Cas9 vector system.

Authors:Sakuma T, Nishikawa A, Kume S, Chayama K, Yamamoto T,

Journal:

PubMed ID:24954249

CRISPR/Cas9-mediated genome editing is a next-generation strategy for genetic modifications, not only for single gene targeting, but also for multiple targeted mutagenesis. To make the most of the multiplexity of CRISPR/Cas9, we established a system for constructing all-in-one expression vectors containing multiple guide RNA expression cassettes and a Cas9 nuclease/nickase ... More

Enhanced CRISPR/Cas9-mediated precise genome editing by improved design and delivery of gRNA, Cas9 nuclease, and donor DNA.

Authors:Liang X, Potter J, Kumar S, Ravinder N, Chesnut JD

Journal:J Biotechnol

PubMed ID:27845164

'While CRISPR-based gene knock out in mammalian cells has proven to be very efficient, precise insertion of genetic elements via the cellular homology directed repair (HDR) pathway remains a rate-limiting step to seamless genome editing. Under the conditions described here, we achieved up to 56% targeted integration efficiency with up ... More

Improved delivery of Cas9 protein/gRNA complexes using lipofectamine CRISPRMAX.

Authors:Yu X, Liang X, Xie H, Kumar S, Ravinder N, Potter J, de Mollerat du Jeu X, Chesnut JD,

Journal:Biotechnol Lett

PubMed ID:26892225

'To identify the best lipid nanoparticles for delivery of purified Cas9 protein and gRNA complexes (Cas9 RNPs) into mammalian cells and to establish the optimal conditions for transfection. Using a systematic approach, we screened 60 transfection reagents using six commonly-used mammalian cell lines and identified a novel transfection reagent (named ... More

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