Cells-to-cDNA™ II 试剂盒

Ambion™ Cells-to-cDNA™ II 试剂盒（正在申请专利）可在2小时内从培养的哺乳动物细胞产生 cDNA。无需分离 RNA。该试剂盒包含足够用于100次反应的试剂，非常适合想对少量细胞、大量细胞样品进行逆转录反应或不熟悉 RNA 分离的科学家。

•无需 RNA 纯化
•从培养细胞到 cDNA 不超过2小时
•在低至1个细胞中检测稀有信息
•适用于没有 RNA 分离系统的实验室

适合 RT-PCR 应用
Cells-to-cDNA™ II 试剂盒（正在申请专利）将 RNase 失活和 DNase I 处理整合到兼容 RT-PCR 的细胞裂解缓冲液中，可完全避免 RNA 分离步骤。大多数细胞裂解缓冲液包含强变性剂，如果将其携带进入酶促反应，将抑制大多数酶或使其失活。如果使用不含强变性剂的裂解缓冲液，内源性 RNase 可快速降解细胞 RNA。Cells-to-cDNA™ II 试剂盒含有新型细胞裂解缓冲液，使内源性 RNase 失活，不影响下游的酶促反应。RNase 失活后，可以直接将细胞裂解物添加到 cDNA 合成反应中。Cells-to-cDNA™ II 兼容一步法和两步法 RT-PCR 方案。

定量 — 线性结果且无检出 DNA 污染
为阐明 Cells-to-cDNA™ II 对输入细胞数量变化的定量、线性反应，使用 ABI 7700 序列检测系统进行了实时荧光定量 RT-PCR 实验。针对 GAPDH 绘制周期阈值 (Ct) 相对于细胞浓度的图，得到标准曲线，相关系数为 0.99。因此，在实时荧光定量 RT-PCR 两步法测定中，Cells-to-cDNA™ II 可在1至10,000个细胞/µL 范围内得到线性结果。还应注意，GAPDH 实验的负模板 PCR 对照品为阴性，这表明基因组 DNA 已完全去除。

简单程序
试剂盒可在2小时内完成从培养细胞到 PCR 即用型 cDNA 的所有步骤；无需进行 RNA 分离。首先使用 PBS 洗涤细胞，然后在细胞裂解缓冲液中重悬。短暂的加热可同时裂解细胞并使 RNase 失活。然后采用可选的 DNase 消化技术来降解基因组 DNA，然后进行热失活步骤。然后，将一部分细胞裂解物与所含试剂用于逆转录反应。

配套产品：
SuperTaq™ Thermostable Taq DNA 聚合酶是推荐产品并单独提供（SKU# AM2050 和 AM2052）。为了极佳地扩增大于 1 kb 片段，使用 SuperTaq™ Plus Thermostable Taq DNA 聚合酶（SKU# AM2054 和 AM2056）。