TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒

借助 TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒，无需 RNA 纯化即可直接使用培养细胞进行表达分析。该试剂盒节省了时间，并提供了一个适用于少量样品的简单工作流程，或者可以轻松整合到自动化的高通量应用中。

TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T 试剂盒的特征为：

• 全面 — 优化的工作流程包括去除 gDNA 的细胞裂解试剂、RT 酶混合物、缓冲液和新型 TaqMan™ 基因表达预混液
• 快速 — 7分钟样品制备，包括在室温下进行 DNase 处理
• 方便 — 可以在试管或直接在培养板中裂解样品
• 稳健 — 可以对每份样品 10–100,000 个细胞进行基因表达分析；结果与从纯化 RNA 中获得的相当
• 高效 — 含有足够的试剂从100份起始样品中生成500个实时荧光定量 PCR 结果

TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒包含用于 cDNA 合成的逆转录 (RT) 试剂和用于实时荧光定量 PCR 分析的 TaqMan™ 基因表达预混液，采用独特的方法裂解培养细胞，同时又可去除基因组 DNA 并保持 RNA 的完整性。单独出售 TaqMan™ 引物⁄探针对。

简单7分钟样品制备：完整工作流程的一部分
无论您使用的是孔板还是试管，TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒均使用所述的简单7分钟样品制备程序（如图所示），其专门为 10–100,000 个培养细胞⁄样品而设计。细胞先用 PBS 清洗，再于室温下置于裂解液中裂解5分钟；同时进行 DNase 处理。裂解过程在加入终止液，室温孵育2分钟后被终止。裂解物现在可以在 –20°C 条件下进行逆转录或储存。由于样品直接在培养孔（96孔或384孔）里接受处理，样品处理错误、样品丢失可能性或转移错误极大程度减少，有利于快速高通量检测流程。与传统的多步骤 RNA 分离方案不同，无需加热、清洗或离心。该试剂盒大大简化了耗时费力的 30–60 分钟流程，将其缩短至7分钟。

TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒工作流程可通过任何 >700,000 TaqMan™ 基因表达测定试剂盒进行出色的基因表达评估。该试剂盒已通过各种各样的 TaqMan™ 基因表达测定试剂盒进行了广泛的特异性测试，其性能与通过纯化 RNA 获得的性能相当（如图所示）。

实现出色的性能和灵敏度
不同于某些将 RT 反应中裂解物的量限制在5%的竞品试剂盒，TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒可以容纳总 RT 反应体积的45%作为细胞裂解物。此外，cDNA 可占实时荧光定量 PCR 反应体积的45%。优化的 RT 反应中的较大裂解物体积，以及后续使用 TaqMan™ 基因表达预混液的实时荧光定量 PCR 中的较大 cDNA 体积，可较大限度提高灵敏度。该预混液精确而准确地对靶标进行扩增，可检测少量靶标，如低表达水平的转录物。

通过将恒定数量的人类细胞与不同数量的小鼠细胞混合来测试检测有限靶标量的能力。使用 TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 制备细胞混合物，并测定这些混合物的小鼠特异性和人特异性基因。利用通过传统方法纯化的 RNA 以同样的方式生成比较数据。数据显示，在来自10,000个人类细胞的 RNA 背景中可检测出来自低至10个小鼠细胞的 RNA（如图所示）。TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒检测相对低丰度转录本的能力与纯化 RNA 相当；在低浓度时，其表现更佳。

此外，TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒的性能与其他竞品裂解物试剂盒和纯化 RNA 也相当。检查了 100–100,000 个细胞⁄裂解反应的上样量。TaqMan™ Cells-to-C_T™ 试剂盒与使用纯化 RNA 的方案所获得的灵敏度相同，并且超越了竞品裂解物（如图所示）。此外，在高细胞上样量时没有抑制作用并且技术性重复之间的差异较低，这表明这种方法在使用培养细胞进行基因表达研究的可靠性。

经过一致验证的卓越性能
TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒的所有组分均经过优化，具有一致且可靠的性能。这样可以消除不同样品制备、RT 和实时荧光定量 PCR 试剂盒组装过程中的猜测。此外，已采用 TaqMan™ 基因表达测定试剂盒对 TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒进行了验证，进一步保证了质量。

附属产品
TaqMan™ Cells-to-C_T™ 对照试剂盒设计用于配合 TaqMan™ 基因表达 Cells-to-C_T™ 试剂盒一起使用。该试剂盒包含一个内源性对照 (ACTB)，用于对样品上样可变性进行标准化，以及一个人工 XenoRNA™ 对照和相应的 TaqMan™ 基因表达测定试剂盒，以监测 PCR 抑制的效果。