Grace 中的 Sf21 细胞

Sf9与Sf21细胞应是贴壁较弱的细胞。不过，某些Sf9和Sf21细胞能够非常紧密地贴附于培养容器。我们尝试使用过胰酶，胶原酶，透明质酸酶，TrypLE Express和的TrypLE Select，均未能成功传代细胞。几次传代之内细胞还可能会解离，但之后就无法有效解离了。
最佳的方法是在T-培养瓶中培养细胞。盖紧瓶盖，并以瓶盖朝上的方向抓住培养瓶，在台面上以中等力量敲击瓶底2-3次，将会有60%-80%的细胞解离下来，但不会达到100%，这样就有足够的细胞解离下来用于传代。如果在台面敲击培养瓶过于猛烈或次数太多，细胞活力将受到很大影响。
在可能条件下，我们推荐您以悬浮条件培养您的细胞。如果需要的话悬浮培养的细胞可随时直接传代至贴壁培养的条件。悬浮培养的细胞也能够达到更高的细胞密度，因为细胞生长不受限于表面积。

如果细胞密度过低，而且已经培养了4-5天，我们推荐您通过100 × g离心5分钟来富集细胞，并将其重悬于新鲜的培养基中。细胞在同一培养基体系中不应滞留超过4-5天，因为这一时间段内细胞会耗尽培养基中的养分，长时间暴露于较高温度下也会导致培养基自身发生降解。当培养时出现大量细胞碎片时，也可对细胞进行离心和富集。

昆虫细胞远比许多哺乳动物细胞系更为脆弱。这些细胞在过度生长和过度分离之后，会比哺乳动物细胞出现更多损伤。在悬浮培养时一定不要让细胞密度超过8 x 10E6细胞/mL或以低于0.5 x 10E6个细胞/mL的密度下生长。昆虫细胞需要略高于哺乳动物细胞的渗透压条件（340 μOsM）。昆虫细胞需要大量的O2，特别是在蛋白表达阶段。昆虫细胞培养基比哺乳动物培养基要酸得多（pH6.0-6.4）。昆虫细胞培养基是基于磷酸缓冲体系的。因此，无需使用CO²来维持pH值。

我们推荐采用Sf9或Sf21细胞进行重组病毒的转染，纯化和扩增操作。Sf9细胞的大小比较规则，易于操作，并能够生长为适于噬斑测定的优良单层细胞。Sf9与Sf21细胞也可用于重组蛋白的表达，不过使用High Five细胞系可能会获得更高的产量。
我们推荐使用High Five细胞系来表达分泌型重组蛋白。它们适于在无血清培养基中悬浮培养，可高水平表达的重组蛋白（Davis et al., 1992）
注意：一般来说，在优化蛋白表达情况之前，使用一种细胞系进行表达尝试比较方便。一旦您确定了您的重组蛋白已成功表达，即可尝试使用其他细胞系来优化表达水平。

不可，我们不推荐这样做。长期暴露于29 degrees C以上的温度会导致细胞死亡。这些细胞最好生长于27 degrees C或室温条件下。