Grace 中的 Sf9 细胞

这种形态的细胞一般在细胞生长数周后才会出现。对于高密度的冻存细胞或表达蛋白而言，它们并不见得有什么害处。不过，如果这些细胞的比例很高，就可能提示细胞正在发生老化，应以一管新的冻存细胞重新开始培养。

黄色颗粒可能是细胞器，聚集物或细胞碎片。我们第一次融解冻存细胞时也看到过这些粒子。为了避免出现此种现象，您可将振荡培养物静置5分钟，之后将上1/3的培养物转移至一个新的培养瓶中，移种之前要对细胞进行计数。您也可使用最高 200U/mL的肝素来减少聚集。终浓度为0.2%的Pluronic溶液也可用于减少剪切力的作用，振荡速度也可增至100–120rpm。刚刚解冻的细胞也可能发生破裂并释放小型囊泡，正如显微镜在高倍放大后观察到的那样。为了减少这些小颗粒的数量，应对细胞进行快速而彻底的解冻操作，这对于成功融化冻存细胞十分重要。此外：

1.将冻存管从水浴中转移至超净台时，请将冻存管一直置于冰上。
2.尽可能温和地进行加样操作，因为较大表面积使细胞很容易受到剪切力的损伤。
3.从解冻后的冻存管向培养瓶中转移细胞时，不宜使用冷培养基。
4. 30-45分钟后大部分细胞一经贴壁，就应更换培养基。应使用预温的培养基（27 degrees C）进行更换。冻存培养基中所含的10% DMSO在长时间接触后（最高1小时）会杀死细胞。
5.最后，需要检查细胞是否被污染。将一小部分培养物接种于T-25培养瓶中培育三天，之后检查是否浑浊。

这些细胞稀释过度了。一般情况下，我们推荐Sf9细胞的最低培养密度为50万个细胞/mL。

这对于Sf9细胞来说很正常。通常情况下，我们推荐让细胞恢复一周时间，之后再检查细胞活力。这时细胞应接近1-2百万个细胞/mL的密度，可以分至更低浓度进行培养。

我们一般推荐您通过机械法，而非酶促消化法（即胰酶/EDTA）解离Sf9细胞。您只需用纸巾包裹培养瓶，再将其较窄的一端在台面敲击，即可达到这一目的。这一操作会使昆虫细胞从培养瓶壁脱离下来。