Express Five™ 培养基中的 High Five™ 细胞
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Express Five™ 培养基中的 High Five™ 细胞

High Five™ 细胞 (BTI-TN-5B1-4) 是来自于亲本粉纹夜蛾细胞系(粉纹夜蛾卵巢)的克隆分离株,通常用于使用杆状病毒表达载体系统 (BEVS) 进行的重组蛋白表达。High了解更多信息
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B855023 x 10^6 个细胞
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价格(CNY)
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3 x 10^6 个细胞
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High Five™ 细胞 (BTI-TN-5B1-4) 是来自于亲本粉纹夜蛾细胞系(粉纹夜蛾卵巢)的克隆分离株,通常用于使用杆状病毒表达载体系统 (BEVS) 进行的重组蛋白表达。High Five™ 昆虫细胞可以适应 Express Five™ SFM 中的无血清培养,以获得较高水平细胞生长和重组基因表达。High Five™ 昆虫细胞(冷冻在 Express Five™ SFM 中)具有以下特点:

•多种表达系统的重组蛋白表达
• 分泌性蛋白表达高达 Sf9 细胞的十倍
• 贴壁或悬浮培养时生长良好
• 质量和性能检测

多种表达系统的重组蛋白表达
可使用 BaculoDirect™ 杆状病毒表达系统Bac-to-Bac™ 杆状病毒表达系统InsectDirect™ 表达系统实现 High Five™ 细胞的高水平蛋白表达。

分泌性蛋白表达高达 Sf9 细胞的十倍
High Five™ 细胞是昆虫细胞分泌性蛋白表达的较佳选择。它们可持续以 Sf9 细胞的 5–10 倍水平表达蛋白。

贴壁或悬浮培养时生长良好
对 High Five ™ 细胞进行解冻以进行贴壁培养,形成不规则的单层细胞和的可能很难分离的斑块。Express Five™ SFM 的贴壁生长方案见产品手册。High Five™ 细胞可适应悬浮培养。

质量和性能检测
检测了每批次 High Five ™ 细胞从冷冻保存中复苏后的细胞生长和活力。

警告:请至少于2级生物安全防护措施条件下操作任何具有潜在生物危害性的材料。本品含有二甲亚砜(DMSO),这是一种有害试材。请在操作前浏览材料安全性数据表。请在操作前浏览材料安全性数据表。
仅供科研使用。不可用于人或任何动物的治疗或诊断用途。
规格
推荐培养基Express Five™ SFM(无血清培养基)
池数量3 x 106 cells
产品线High Five
产品类型High Five 细胞
数量3 x 10^6 个细胞
细胞系High Five™
细胞类型昆虫细胞
种属Trichoplusia ni
Unit SizeEach
内容与储存
High Five 冷冻细胞:
•储存条件:液氮(气相)

Express Five 无血清培养基:
•储存条件:2°–8°C
• 避光储存

L-谷氨酰胺,100X:
• 储存条件:-5 至 -20°C
• 避光储存

常见问题解答 (FAQ)

我在Grace’s加血清昆虫培养基中培育的High Five细胞正处于对数生长期。为何这些High Five细胞形成了大块自由漂浮的细胞团,只有极少的细胞成功贴壁?

看起来这些细胞长得过满了。High Five细胞在有血清存在的条件下生长极为迅速。由于这一培养瓶中没有更多空间供细胞生长,因此请尽快分种这些细胞。我们建议您按照1:15的比例进行分种,并每天观察细胞生长情况。尽管可以加入20倍浓度的肝素,我们还是推荐您使用10 μg/mL这一工作浓度。尝试加入一些FBS(0.1%)10-20分钟,之后进行换液。

当为High Five细胞准备肝素时,你们以何种温度保存肝素溶液?

肝素可保存于室温。肝素通常以10 μg/mL的浓度进行使用,尽管超出20倍的浓度也是可行的。

既然High Five细胞的蛋白表达高于Sf9,我是否应该直接使用High Five细胞尝试开展蛋白表达实验?

我们同时推荐您以High Five和Sf9这两类细胞来小规模尝试蛋白转染生产实验。通常每毫升的Sf9细胞培养物所生成的蛋白产物稍多,因为它们可于3–4 x 10E6个细胞/mL的密度下完成转染。High Five在大于2 x 10E6个细胞/mL的密度下就已完全进入对数生长期,因此它们不宜在高于2 x 10E6个细胞/mL的密度下进行转染。

我应如何富集我的昆虫细胞以增加细胞密度?

如果细胞密度过低,而且已经培养了4-5天,我们推荐您通过100 × g离心5分钟来富集细胞,并将其重悬于新鲜的培养基中。细胞在同一培养基体系中不应滞留超过4-5天,因为这一时间段内细胞会耗尽培养基中的养分,长时间暴露于较高温度下也会导致培养基自身发生降解。当培养时出现大量细胞碎片时,也可对细胞进行离心和富集。

昆虫细胞培养与哺乳动物细胞培养之间的主要区别是什么?

昆虫细胞远比许多哺乳动物细胞系更为脆弱。这些细胞在过度生长和过度分离之后,会比哺乳动物细胞出现更多损伤。在悬浮培养时一定不要让细胞密度超过8 x 10E6细胞/mL或以低于0.5 x 10E6个细胞/mL的密度下生长。昆虫细胞需要略高于哺乳动物细胞的渗透压条件(340 μOsM)。昆虫细胞需要大量的O2,特别是在蛋白表达阶段。昆虫细胞培养基比哺乳动物培养基要酸得多(pH6.0-6.4)。昆虫细胞培养基是基于磷酸缓冲体系的。因此,无需使用CO2来维持pH值。

引用和文献 (35)

引用和文献
Abstract
OX40 stimulation by gp34/OX40 ligand enhances productive human immunodeficiency virus type 1 infection.
Authors: Takahashi Y; Tanaka Y; Yamashita A; Koyanagi Y; Nakamura M; Yamamoto N;
Journal:J Virol
PubMed ID:11435553
'OX40 is a member of the tumor necrosis factor (TNF) receptor superfamily and known to be an important costimulatory molecule expressed on activated T cells. To investigate the role of costimulation of OX40 in human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection by its natural ligand, gp34, the OX40-transfected ACH-2 cell ... More
Kinesin Superfamily Motor Protein KIF17 and mLin-10 in NMDA Receptor-Containing Vesicle Transport
Authors:Mitsutoshi Setou, Terunaga Nakagawa, Dae-Hyun Seog, Nobutaka Hirokawa *
Journal:Science
PubMed ID:10846156
'Experiments with vesicles containing N-methyl-D-aspartate (NMDA)receptor 2B (NR2B subunit) show that they are transported alongmicrotubules by KIF17, a neuron-specific molecular motor in neuronaldendrites. Selective transport is accomplished by direct interaction of theKIF17 tail with a PDZ domain of mLin-10 (Mint1/X11), which is aconstituent of a large protein complex including mLin-2 ... More
Alphaherpesvirus origin-binding protein homolog encoded by human herpesvirus 6B, a betaherpesvirus, binds to nucleotide sequences that are similar to ori regions of alphaherpesviruses.
Authors:Inoue N, Dambaugh TR, Rapp JC, Pellett PE
Journal:J Virol
PubMed ID:8207791
'We previously identified a human herpesvirus 6B (HHV-6B) homolog of the alphaherpesvirus origin-binding protein (OBP), exemplified by the herpes simplex virus type 1 UL9 gene product. This finding is of particular interest because HHV-6B is otherwise more closely related to members of the betaherpesvirus subfamily. The prototypic betaherpesvirus, human cytomegalovirus, ... More
Interaction of human nuclear topoisomerase I with guanosine quartet-forming and guanosine-rich single-stranded DNA and RNA oligonucleotides.
Authors: Marchand Christophe; Pourquier Philippe; Laco Gary S; Jing Naijie; Pommier Yves;
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:11756434
'Human nuclear DNA topoisomerase I (top1) plays a crucial role in DNA replication, transcription, and chromosome condensation. In this study, we show that intra- and intermolecular guanosine quartets (G-quartets) can inhibit top1-mediated DNA cleavage at a high affinity site. Top1-mediated DNA cleavage was also inhibited by a 16-mer single-stranded oligodeoxynucleotide ... More
Purification and characterization of human DNA damage checkpoint Rad complexes.
Authors: Lindsey-Boltz L A; Bermudez V P; Hurwitz J; Sancar A;
Journal:Proc Natl Acad Sci U S A
PubMed ID:11572977
'Checkpoint Rad proteins function early in the DNA damage checkpoint signaling cascade to arrest cell cycle progression in response to DNA damage. This checkpoint ensures the transmission of an intact genetic complement to daughter cells. To learn about the damage sensor function of the human checkpoint Rad proteins, we purified ... More