Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 647 流式细胞分析检测试剂盒,50 次反应
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Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 647 流式细胞分析检测试剂盒,50 次反应
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Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 647 流式细胞分析检测试剂盒,50 次反应

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Click-iT® Plus EdU Alexa Fluor® 647 流式细胞分析检测试剂盒用于分析增殖细胞中的 DNA 复制,是一种较传统 BrdU了解更多信息
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C1063450 assays
货号 C10634
价格(CNY)
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Click-iT® Plus EdU Alexa Fluor® 647 流式细胞分析检测试剂盒用于分析增殖细胞中的 DNA 复制,是一种较传统 BrdU 法更简单、更可靠的检测方法。采用流式细胞仪的 647 nm 激光分析新合成的 DNA。Click-iT® Plus 配方与标准荧光基团(包括 R-PE、R-PE 串联体以及荧光蛋白)兼容。

•可联用—可与 R-PE(和串联体)及荧光蛋白兼容
•准确—检测结果优于 BrdU 检测
•快速—可在短短 60 分钟内获得结果

查看流式细胞分析所有 Click-iT™ EdU 和 Click-iT™ Plus EdU 检测的选择指南

可联用
与初代 Click-iT® EdU 流式细胞分析检测相比,Click-iT Plus® 配方具有更好的联用性。Click-iT® Plus EdU 检测可与 R-PE 和 R-PE 串联体,以及各种荧光蛋白(如 GFP 和 mCherry)配合使用,同时还具有初代 Click-iT® EdU 检测准确、快速的特点。

更出色的 BrdU 替代方法,提供更优结果
更准确的增殖分析方法,可直接测量 DNA 合成。最初,这是通过掺入放射性核甘酸来完成的。随后基于抗体的溴脱氧尿苷(BrdU,核苷类似物)法取代了这种检测方法。Click-iT® Plus EdU 流式细胞分析检测是替代 BrdU 检测的新方法。EdU(5-乙炔基-2´-脱氧尿苷)是胸苷类似物,可在活跃的 DNA 合成过程中掺入 DNA 中。检测基于点击化学,在铜催化反应中,炔与染料标记的叠氮化物反应,形成稳定的共价键。在该应用中,在 EdU 的乙炔基团中发现了炔烃,而叠氮化物偶联至 Alexa Fluor® 染料。标准流式细胞分析方法用于检测细胞群中 S 期细胞的百分比。

温和条件,可与细胞周期染料和抗体配合使用
小型叠氮染料,可使用温和条件高效检测掺入的 EdU,同时具有足够的基于醛的标准固定和去污剂透化能力,可用于 Click-iT® Plus 检测试剂,以获得 DNA。这与 BrdU 检测相反,BrdU 检测需要使用 HCl、加热或用 Dnase 消化变性 DNA,使 BrdU 暴露以便用抗 BrdU 抗体检测。BrdU 法处理样品会改变细胞周期分布,且 HCl 可破坏抗原识别位点。相比之下,易于使用的 Click-iT® Plus EdU 检测与细胞周期染料兼容。Click-iT® Plus EdU 检测也可与细胞表面和细胞内标记物的抗体以及标记标准荧光基团的偶联物(包括 R-PE、R-PE 串联体和荧光蛋白(GFP 和 mCherry)联用。

快速简便的方案
Click-iT® Plus EdU 方案基于免疫组化抗体标记的醛基固定和洗涤剂透化步骤。但是,EdU 与其他固定剂/透化剂(包括皂苷和甲醇)兼容。只需五步就能分析细胞增殖数据:

1.’用 EdU 处理细胞。
2.固定并透化细胞。
3.使用 Click-iT® Plus 检测混合物检测 S 期细胞 30 min。
4.清洗一次。
5.分析。

在某些情况下,60 分钟内即可获得结果,但我们建议所有应用采用 90 分钟。
仅供科研使用。不可用于诊断程序。
规格
检测方法荧光
染料类型Alexa Fluor™ 647
产品规格
环保功能危害更小
数量50 assays
运输条件室温
发射650⁄670
适用于(设备)流式细胞仪
产品线Click-iT™
产品类型流式细胞分析测定试剂盒
Unit SizeEach
内容与储存
含有 EdU(5-乙炔基-2'-脱氧尿苷)、Alexa Fluor™ 647 吡啶甲基叠氮化物、无水二甲基亚砜 (DMSO)、Click-iT™ 固定剂、Click-iT™ 皂苷基透化液和洗涤缓冲液、铜保护剂和 Click-iT™ EdU 缓冲液添加剂。
  • 储存于 2°C 至 8°C
  • 干燥避光储存。

    常见问题解答 (FAQ)

    我发现自己的点击标记样品无信号或特异性信号非常低,如何提高信号?

    •当铜离子在合适的化合价时,点击反应才有效。除了DIBO炔烃-叠氮化物反应外,在缺乏铜离子的条件下,叠氮化物和炔烃不会相互反应。确保在制备之后、二价铜(II)浓度最高时,立即使用点击反应混合物。
    •不要使用已经变黄的添加剂缓冲液;其必须无色状态下才有活性。
    •为确保TdT酶和点击反应试剂能够到达核内,细胞需要充分地固定和通透。为确保有足量的TdT能进入,组织样品需要用蛋白酶K或其他蛋白水解酶消化。
    •部分试剂能结合到铜离子上,并减少其足以催化点击反应的有效浓度。click反应前,不要在任何缓冲液或试剂中引入任何金属螯合剂(例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等)。避免缓冲液和试剂中引入其他可能被氧化或还原的金属离子。进行click反应前,可能需要向细胞或组织样品加入额外的洗涤步骤。
    •您可以用新鲜的试剂再次进行点击反应,从而提高信号。将点击反应的时间延长至超过30分钟,并不会提高信号。用新鲜的点击反应试剂再次进行30分钟的孵育,可更有效地提高标记效率。
    •自己的细胞可能没有凋亡。准备一份DNase I处理的阳性对照,验证TdT酶反应和点击标记反应是否正确进行。

    我对自己的Click-iT EdU TUNEL标记样品成像时,观测到较高的非特异性本底。这是什么原因造成的?如何降低本底干扰?

    click反应在叠氮化物和炔烃类间极具选择性。生物体系不可能有其他副反应。任何非特异性背景都是由于染料和多种细胞内组分的非共价连接。Select FX信号增强剂在click反应后减少染料的电荷为基础的非特异性连接方面效果不明显;我们不推荐将其与Click-iT检测试剂一同使用。最佳的减少背景的方法是增加BSA清洗的次数。你应该在同样的过程和检测条件下做无染料或无click反应对照,以证实背景确实是由于染料而不是自发荧光。你同时应该在无TdT酶的对照样品进行完整的click反应来证实click反应信号的特异性。 

    我注意到,当我在click反应后用DAPI染色细胞并检测EdU的掺入时,相比于我的无click反应对照样品,DAPI信号非常低。是什么原因导致DAPI信号降低?

    click反应中的铜离子使得DNA少量变性(虽然没有BrdU检测所需要的程度),这会影响到包括DAPI和Hoechst染色剂在内的DNA染料的结合亲和力。这种影响只会在传统的EdU试剂盒中出现,而Click-iT Plus EdU试剂盒由于采用的铜离子浓度低,不会出现这种现象。 

    我观测到自己的的click标记样品无信号或信号非常低,如何提高信号?

    •当铜离子在合适的化合价时,点击反应才有效。除了DIBO炔烃-叠氮化物反应外,在缺乏铜离子的条件下,叠氮化物和炔烃不会相互反应。确保在制备之后、二价铜浓度最高时,立即使用点击反应混合物。
    •不要使用已经变黄的添加剂缓冲液;其必须无色状态下才有活性。
    •细胞需要充分固定和通透,确保click试剂能充分接触到细胞内已掺入click底物的成分。
    •部分试剂能结合到铜离子上,并减少其足以催化点击反应的有效浓度。click反应前,不要在任何缓冲液或试剂中引入任何金属螯合剂(例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等)。避免缓冲液和试剂中引入其他可能被氧化或还原的金属离子。进行click反应前,可能需要向细胞或组织样品加入额外的洗涤步骤。
    •你可以用新鲜的实验试剂重复click反应尝试提高信号。增加click反应的时间长于30分钟不会提高低的信号。用新鲜的click反应试剂进行第二次30分钟培养在提高标记上更加有效。
    •低信号同时也可能是因为EdU、EU和其他click底物的掺入水平较低。如果无法进行充分交联或使用的固定剂有误,其他掺入到细胞组件的click底物(如AHA、HPG、棕榈酸、叠氮化物等)可能会丢失。对于掺入到细胞膜或脂质的click底物,应避免使用乙醇或丙酮固定剂和透化试剂。
    •在click反应时,掺入的click底物必须可被接触;相比于变性蛋白,天然蛋白中掺入的氨基酸模拟物的标记水平可能更低。
    •你可能需要优化代谢标记条件,包括模拟物孵育时间和浓度。健康的、传代数不高、不太密集的细胞可能更容易掺入模拟物。如果孵育时间达到关注的细胞数目翻倍的时间,则应在多个整倍时间点设置包含额外剂量的click底物的阳性对照。

    当我分析click标记样品时,观测到较高的本底干扰,这是什么原因所致?如何减少本底干扰?

    click反应在叠氮化物和炔烃类间是非常有选择性的。生物体系不可能有其他副反应。任何非特异性本底都是由于染料和多种细胞组件的非共价结合造成的。在click反应后,Select FX信号增强剂在减少染料非特异性电荷连接方面的作用失效;我们不推荐将其与Click-iT检测试剂一同使用。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。您应始终在同等的处理和检测条件下做无染料或无click反应对照,以证实本底确系染料而非自发荧光所致。此外,您还可在无EdU 或无-EU,仅含溶剂的对照样本上进行完整的click反应,验证click反应信号的特异性。