CellTrace™ BODIPY™ TR 甲酯（GFP 亲脂性复染）

我们提供小份的CellTrace试剂，强烈建议您丢弃任何未用的DMSO染料储液。CellTrace试剂有乙酰酯基团，可以覆盖染料的电荷使得它们可以透过细胞，并且琥珀酰亚胺酯胺反应分子允许共价结合到细胞组件，可长时间滞留。如果储存环境中中含有水，乙酰酯和琥珀酰亚胺酯都易于水解。DMSO是吸水性的，因此极易从大气中吸收水。如果您必须要储存自己的染料储备液，需要使用高质量的无水DMSO储液（且不能经常打开），并将小瓶密封放置于密封的含有干燥剂的地方，尽可能保持DMSO/染料储液干燥。 

以下为有助于实现均一染色，明亮、清晰的亲代增殖峰的建议：

•临使用前，使用试剂盒附带的DMSO或高质量无水DMSO溶解CellTrace染料储备液，获得最佳的反应活性和细胞透性。
•在PBS或其他无胺、无蛋白生理学缓冲液染色，不要在培养基中染色。
•从单细胞悬液开始染色，并在染色过程中轻轻摇动细胞。
•通过在冷的培养基中孵育细胞5分钟，快速去除未结合的染料，之后用预热培养基洗涤洗细胞两遍。
•在检测体系中引入死细胞染料，并仅对活细胞设门限。
•尽可能多地分析每个样品中的细胞。
•流体动力聚焦细胞流式细胞仪使用低的流动速率。
•CellTrace染料最好的染色浓度通常介于1-10 µM之间，但针对某些类型细胞的最佳浓度会存在差异。观察不同稀释度的染色剂的染色结果，确定您的细胞最适宜的染色浓度。
•某些类型的细胞吸收染料后的染色强度分布范围较广。如果您的细胞也是这种情况，则需要首先分选染色的未刺激亲本细胞，从而选择出一个窄的峰分布。

我们提供小份的CellTrace试剂并强烈建议丢弃任何未用的DMSO染料储备液。CellTrace试剂有二醋酸基团可以封闭染料的电荷，使得它们可以透过细胞并且琥珀酰亚胺酯胺反应基团可允许长时间滞留。如果储存环境中含有水，二醋酸盐和琥珀酰亚胺酯都易于水解。DMSO是吸水性的因此极易从大气中吸收水。如果您必须要储存您的染料储备液，您需要使用高质量的无水DMSO储备液，不能经常打开且将小瓶密封放置于密封的含有干燥剂的地方来保持DMSO/染料储备液尽可能的干燥。-20°C保存。在短时间内尽快使用。

CellTrace细胞增殖试剂是一种细胞透过型染料，胞内酯酶可将其分解产生高荧光化合物并可以共价地结合到细胞内的胺类上，将染料附着于多种细胞内组分并产生稳定的信号。这些试剂毒性很小并对多种细胞增殖活性的影响很小。 

用CellTrace试剂绘制出好的传代曲线的关键是在开始时均匀标记细胞，使它们在标记零点有紧密的变异系数（CV）。如果峰太宽，迭代相互重叠，一系列峰将成为一个驼峰。由于染色程度与细胞大小成正比，可以从统一的细胞群（而非淋巴细胞和粒细胞等混合的细胞群）开始标记，实现均匀的标记。细胞标记时间很短，所以您需要预先稀释染料，迅速混入你的细胞。请确保您的细胞未沉积在试管底部。实现这一点最简单的方法就是准备一份2X染色液（1×= 1-10μM），在一半体积（无血清或BSA）培养基中重悬细胞。将染料添加到细胞中并倒置几次以混合。染色过程中轻轻晃动细胞。染料孵育结束后（20分钟，37℃）即添加血清或BSA（至少1％），以清除任何残留的未反应染料。离心细胞，洗涤一遍，然后在完全培养基中重悬。经10-20分钟的脱酯化孵育后，细胞即可用于你们的实验。一定要确保有一个零点对照，因为您需要知道细胞第一次传代的时间。