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采用改良的直接铺板法,使用该培养基检测食品中的大肠杆菌并对其进行计数。
采用改良的直接铺板法和 Thermo Scientific™ Oxoid™ 胰蛋白胨胆汁琼脂(干粉)检测并计数食品中的大肠杆菌。Anderson 和 Baird-Parker 描述的直接铺板法 (DPM) 是对 Delaney 等人1方法的改良。该方法开发用于检测和计数水和食品样品中的大肠杆菌,其利用大肠杆菌 44°C 在胰蛋白胨胆汁琼脂平板上的醋酸纤维素膜上生长时通过色氨酸产生吲哚的能力。
环境或食品样本中存在的大肠杆菌和大肠菌群的回收和计数是卫生学的重要指标。根据 Anderson 和 Baird-Parker2 的配方开发了胰蛋白胨胆汁琼脂,用于检测和计数食品中的大肠杆菌。
相对于较老的方法,它有几个优点:
Anderson 和 Baird-Parker 描述的直接铺板法 (DPM) 是对 Delaney 等人2方法的改良。该方法开发用于检测和计数水和食品样品中的大肠杆菌,其利用大肠杆菌 44°C 在胰蛋白胨胆汁琼脂平板上的醋酸纤维素膜上生长时通过色氨酸产生吲哚的能力。
作者得出结论,对于大肠杆菌产肠毒素和非产肠毒素菌株,吲哚的形成是比乳糖发酵更可靠的特征。Ewing3 发现仅 90% 的埃希菌菌株在两天内利用乳糖产酸,而 99% 的菌株产吲哚。
国际食品微生物标准委员会(International Commission on Microbiological Specifications for Foods,以下简称 ICMSF)4 比较了最可能数(Most Probable Number,以下简称 MPN)和 Anderson-Baird-Parker 直接铺板法(DPM),并得出结论,DPM 比 MPN 更适合计数生肉中的大肠杆菌,因为其变异性较小、冷冻样品的回收率较好、速度较快,且所需培养基量较少。
直接铺板法能计数 MPN 可能遗漏的大肠杆菌厌氧菌和晚乳糖发酵菌株。根据 Ewing3,这些微生物占埃希菌菌株的 10%。
Holbrook 等人5 进一步改良了直接铺板法,用于检测和计数冷冻、干燥、热加工或酸性食品中大肠杆菌的亚致死性损伤细胞。在该改良中,将接种物涂布在矿物质改性谷氨酸盐琼脂上的醋酸纤维素膜上,并在 37°C 孵育 4 小时。在将膜转移至胰蛋白胨胆汁琼脂平板之前,复苏步骤可以修复应激细胞。
研究表明,高水平可发酵碳水化合物的存在会抑制色氨酸酶6的合成,从而终止吲哚的形成。Holbrook 等人已经证明,复苏步骤可以将接种物中的高浓度糖降低至不会干扰大肠杆菌在胰蛋白胨胆汁琼脂上生长时产生吲哚的水平。在检测乳制品或其他含有高浓度糖的产品时,应始终进行复苏步骤。
发现 Vracko 和 Sherris7 描述的吲哚试剂最适合,反应和重现性最明显。该试剂(含 5% 对二甲氨基苯甲醛的 1N 盐酸溶液)易于制备,在室温下避光保存三个月不会变质。
使用吲哚试剂染色’时,所有吲哚阳性菌株均产生边界明显粉色菌落;不产生吲哚的菌落为淡黄色。
胆盐的选择性作用和升高的孵育温度可抑制大肠杆菌以外的吲哚阳性菌的生长。
染色’膜可通过在阳光直射或低压荧光紫外线灯(具有 Woods’型过滤器)下干燥固定’。干燥后,可改善染色反应的强度,并可储存此类膜以供参考。
并非所有产品在所有国家(地区)均有售。详情请具体咨询。
Remel™ 和 Oxoid™ 产品现已归属 Thermo Scientific 品牌旗下。
一般参考文献: