GM-CSF CTS™ 重组人蛋白

我们的重组蛋白是以冻干粉的形式运送的。在大多数情况下管中可见蛋白粉末沉淀，有些时候粉末沉淀会脱离原位，粘附在管盖或管壁上。短暂的离心就可将蛋白粉末沉淀收集于管底。不过，并非所有的冻干蛋白均为肉眼可见。在大多数情况下，可见的白色粉末沉淀是原始缓冲溶液中的盐分，管中粉末沉淀大小与重组蛋白的量之间可能并无直接的相关性。如果重组蛋白在冻干前使用了不含盐分的溶剂，则可能并不容易看到粉末沉淀（通常为透明的）。您可通过在SDS PAGE上电泳少量的重溶蛋白溶液来确定蛋白的存在。一般来说，只需在丙烯酰胺胶中上样10ng蛋白，就可清晰地观察到确定预期大小的蛋白条带。

分析时间至关重要。每一种分析都需要进行条件优化并在响应的峰值时间进行。不同种类的细胞对于生长因子或细胞因子的响应可能会有差异。我们建议推荐用户按照产品手册中的推荐方法，使用相同的指示细胞重复我们的质控（QC）分析，来观察是否能够获得类似的反应结果。此外，血清也可能掩盖细胞的响应情况。对某些类型分析实验可能需要对细胞进行血清饥饿处理。

如果您按照我们产品插页中的描述进行了测试，但未见到任何反应，则可能由以下几种原因导致：

- 蛋白未按照说明书推荐方式进行溶解。
- 溶解后的蛋白放置时间过长或蛋白发生沉淀。我们推荐您在重新溶解后的3-6个月内使用这些蛋白产品。
- 当重新溶解的蛋白溶液浓度低于0.1 mg/mL时，未添加载体蛋白。低于0.1 mg/mL的工作液应立即使用；我们不推荐长期储存此浓度的蛋白溶液。
- 蛋白溶液经过多次冻融循环或暴露于高温条件下。
- 使用错误类型的容器操作蛋白（某些蛋白非常容易粘附于某些塑料器皿上）。

溶解性问题可能由操作不当，或未使用推荐溶剂所导致。我们推荐您在打开试剂管前将冻干粉平衡至室温，并使用产品手册中推荐的缓冲液溶解蛋白产品（某些蛋白在低pH缓冲体系中溶解得更好）。请勿配制使用蛋白浓度大于1 mg/mL的浓度溶解蛋白产品。请勿剧烈震荡或混合蛋白溶液。将重新溶解的蛋白置于4°C条件下孵育过夜可能有助于解决任何可溶性问题。

生物分析法常被用来检测某一特定生长因子或细胞因子的生物学活性。在大多数情况下，研究人员一般基于各类指示性细胞——如某些原代细胞或细胞系——来开展生物分析。最为常用的生物分析法包括细胞增殖分析(https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/Documents/PDFs/Cell-Proliferation-Assay.pdf)，细胞趋化性分析(https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/Documents/PDFs/Chemotaxis-Assay.pdf)，细胞因子生成分析(https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/Documents/PDFs/Cytokine-Production-Assay.pdf)和细胞毒性分析(https://www.thermofisher.com/content/dam/LifeTech/Documents/PDFs/Cytotoxicity-Assay.pdf)。通常以ED50来表示某一细胞因子的生物活性，该值代表了能够诱发50%最大效应的细胞因子浓度。这一表示效价的方法仅适用于那些剂量效应曲线为S形的细胞因子。