Novex™ 4-20%, Tris-甘氨酸, 1.0 mm, 小型蛋白预制胶, 1 孔

电流异常升高的最常见原因是转膜缓冲液。如果转膜缓冲液浓度太高，会导致电导率增加和电流升高。如果不小心用Tris-HCl代替了转膜缓冲液所需的Tris base，也会导致高电流。Tris-HCl可使缓冲液pH降低，引起电导率和电流升高，从而导致过热。我们建议检查转膜缓冲液及其试剂成分，然后重新稀释或重新配制缓冲液。

以下是经过优化的Bio-Rad半干转设备转印方案。Tris-甘氨酸凝胶转印可使用NuPAGE转膜缓冲液。

1.工作转膜缓冲液：含10%甲醇、1:1,000抗氧化剂的2X NuPAGE转膜缓冲液（Bis-Tris 50 mM和Bicine 50 mM）。如果您需要使用NuPAGE 20X转膜缓冲液（货号NP0006）配制100 mL工作缓冲液，则按下述配方混合：10 mL 20X转膜缓冲液、10 mL甲醇、100 µL抗氧化剂和80 mL去离子水。
2.滤纸：三明治中经转膜缓冲液浸泡的滤纸，是半干转槽中唯一的缓冲液储层。若使用Invitrogen预切膜/滤纸三明治，则凝胶（或膜）两侧至少需要使用3层滤纸（每张滤纸厚0.4 mm）。在组装一个凝胶/膜三明治时，在工作转膜缓冲液（按步骤1配制）中预先浸泡6张Invitrogen滤纸（或2张厚滤纸）和1张膜，然后按以下顺序在阳极板上组装三明治：滤纸--滤纸--滤纸--膜--凝胶--滤纸--滤纸--滤纸。
3.转印条件：我们发现在Bio-Rad半干转仪中使用NuPAGE转膜缓冲液进行转印的最佳条件是电压15 V、转印时间15-30分钟。其他生产商生产的半干转设备，应按照其相应的说明进行使用。
4.转印大分子量蛋白质（≥100 kDa）时，可在组装三明治前，将凝胶置于含0.02-0.04% SDS 的2X NuPAGE转膜缓冲液（无甲醇）中预平衡10分钟。请注意，转印Tris-甘氨酸凝胶时，使用Bio-Rad Trans-Blot SD半干转槽搭配NuPAGE转膜缓冲液的转印效率低于使用XCell II转印模块（半湿转）搭配Tris-甘氨酸转膜缓冲液（货号LC3675）。

可以，我们建议使用含10%甲醇的2XTris-甘氨酸转膜缓冲液，在20V恒定电压下转印30-60分钟。

以下是可能原因和解决方案：

-使用了浓度过高或错误的缓冲液。应检查缓冲液配方；必要时，稀释或重新配制。
-电压、电流或功率设置过高。将电源条件降低至推荐的电泳条件。

请务必查看电源、设备或凝胶是否存在问题。通常，切断电源或开盖查看是否有连接错误可帮助解决问题。同时，应检查凝胶盒底部的胶带是否已去除以及缓冲液核心装置是否损坏。此外，应确保电泳槽中的缓冲液足以浸没凝胶的上样孔。