组蛋白脱甲基酶荧光活性试剂盒

组蛋白脱甲基酶活性研究专用试剂盒提供了荧光活性测定方法，设计用于赖氨酸特异性组蛋白脱甲基酶 1 (LSD1) 和 Jumonji 型脱甲基酶的组蛋白脱甲基酶活性的定量和检测。

该试剂盒包括黑色 96 孔板、LSD1/JMJD2A 检测缓冲液、甲醛标准品及检测所需的其他组件。该试剂盒中不含脱甲基酶样品。LSD1 型或 Jumonji 型脱甲基酶的来源以及任何辅因子、酶底物、抑制剂和/或活化剂均需由用户自行提供。使用此试剂盒时，需搭配能够在发射波长 510 nm、激发波长 450 nm 处读取荧光强度的荧光 96 孔微孔板读数仪。

性能特征
• 检测类型：荧光活性试剂盒
• 样品类型：赖氨酸特异性组蛋白脱甲基酶 1 (LSD1) 和 Jumonji 型脱甲基酶
• 标准曲线范围：LSD1 为 0.128–0.64 μM，JMJD2A 为 2.5–10 μM
• 反应性：人

背景
组蛋白脱甲基酶 (HDM) 催化了组蛋白中甲基-赖氨酸残基的位点特异性脱甲基，以动态调节染色质结构、基因表达，还可能调节其他基因组功能。赖氨酸特异性 HDM 于 2004 年被首次发现，是目前研究较热的用于产生甲醛的酶之一。目前有两种已知的 HDM 类型：黄素腺嘌呤二核苷酸 (FAD) 依赖性赖氨酸特异性脱甲基酶 1 (LSD1) 家族，以及 Fe(II) 依赖性 Jumonji C (JmjC) 家族。虽然 LSD1 和 JmjC HDM 采用了不同的辅因子和催化机制，但两者都在脱甲基反应中产生了甲醛这种副产物。

尽管 HDM 具有重要的生物学意义，但事实证明由于其转换数过低而难以进行定量检测，从而也导致人们对其动力学特性、底物特异性和反应机制还不甚了解。本检测已针对赖氨酸特异性组蛋白脱甲基酶 1 (LSD1) 和 Jumonji 型脱甲基酶进行验证。我们还针对细胞裂解物中的 HDM 样品提供了经特殊配制的细胞裂解缓冲液，这些裂解液已经证明不会对甲醛检测造成干扰。含有 SDS 和 Triton X-100 的细胞裂解缓冲液会抑制甲醛信号反应，因此不可使用。

检测原理
组蛋白脱甲基酶活性试剂盒用于定量测量产生甲醛的酶（如组蛋白脱甲基酶）的酶活性。该试剂盒的独特之处在于，这些酶脱甲基反应所产生的甲醛可直接通过荧光产物进行定量检测。无需分离或洗涤。该试剂盒已针对 LSD1 和 JMJD2A 组蛋白脱甲基酶 (HDM) 进行验证。

该试剂盒中包含用于 HDM LSD1 和 JMJD2A 的优化缓冲液、一份稳定的甲醛标准品、甲醛检测试剂 (FDR)，以及用于检测生成的荧光信号的两块 96 孔板。该试剂盒可用于测量任何酶促反应产生的甲醛。终端用户需自行提供脱甲基酶系统、活性所需的任何辅因子，以及任何测试抑制剂或活化剂。终端用户可使用该试剂盒在许多体内和体外系统中产生 HDM 活性，然后通过测量甲醛生成量来测定活性。对于体外研究，应在我们提供的缓冲液中使用优化的脱甲基反应条件进行 HDM 反应。

在甲醛生成反应发生后，可以通过添加合适的抑制剂来终止反应。随后将 FDR 添加到所有孔中。如果需要对甲醛进行校准（进行跨实验室比较），则应运行从所提供标准品中生成的甲醛标准曲线。在 37°C 下短暂孵育30分钟后，在荧光酶标仪中于 510 nm 处读取荧光产物，激发波长为 450 nm。

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