P450 脱甲基化荧光活性试剂盒

仅供研究使用的 P450 脱甲基酶活性检测试剂盒是一种荧光活性检测试剂盒，设计用于定量和检测肝微粒体或 cerosome（如 Cyp P450 3A4、2B4 和 2D6）中的 P450 脱甲基活性。

该试剂盒包括黑色 96 孔板、检测缓冲液、甲醛标准品和进行测定的其他组分。本试剂盒不含 P450 系统。微粒体、cerosome、baculosome 或 supersome P450 系统或重组 P450 需要由用户提供。使用本试剂盒时，需要能够读取 510 mm 处荧光发射（激发波长 450）的荧光 96 孔酶标仪。

性能特性
•检测类型：荧光活性检测试剂盒
•样品类型：脱甲基 P450 系统，如肝微粒体或 cerosome（如 Cyp P450 3A4、2B4 和 2D6）
•标准曲线范围：1.6–20 pmol/100 μL
• 反应性：人、大鼠

背景
细胞色素 P450 (P450) 是一个含酶血红素的超家族，该等酶在底物特异性和催化活性方面显示出巨大的多样性。P450 使用大量外源性和内源性化合物作为酶促反应中的底物。它们通常会构成多组分电子转移反应的一部分。真核生物 P450 酶的催化涉及一个多步反应循环，该循环包括两个步骤，其中电子转移通过氧化还原反应伴侣完成。二黄素蛋白 NADPH 细胞色素 P450 还原酶同时含有 FAD 和 FMN，可以转移催化循环所需的两个电子3。在一些 P450 反应中，反应循环的第二个电子也可通过细胞色素 b5 递送。

脂质在蛋白纯化后 P450 依赖性活性的重建中起重要作用6。大多数 P450 活性重建体外研究使用二月桂基磷脂酰胆碱 (DLPC) 作为脂质组分。酶活性重建涉及 P450、其氧化还原反应伴侣（NADPH 和还原酶）和脂质的浓缩孵育，然后稀释至最终检测组分。

检测原理
P450 活性检测试剂盒设计用于定量测定甲醛产生酶（如细胞色素 P450）的酶活性。该试剂盒的独特之处在于荧光底物不参与多组分 P450 反应，而是用于测量脱甲基化产物甲醛。无需分离或洗涤。该试剂盒已经过验证，可用于多种 P450 系统，应与产生甲醛作为脱甲基化产物的任何生物系统配合使用。

该试剂盒提供了适用于 P450 的优化缓冲液、用于反应的辅因子 NADPH 冻干小瓶、稳定型甲醛标准品、甲醛检测试剂 (FDR) 和用于检测生成的荧光信号的两个 96 孔板。最终用户将提供微粒体、baculosome 系统或重组 P450、还原酶和细胞色素 b5 系统以及活性所需的任何辅因子以及正在检测的任何候选药物、抑制剂或活化剂。反应应在我们提供的缓冲液或相似的基于 PBS 的缓冲液系统中进行。

在 P450 NADPH 诱导的反应后，可通过添加适当抑制剂或提供的乙酸终止液来终止甲醛生成过程。然后将 FDR 添加至所有孔中。如果需要对甲醛进行校准（用于交叉实验室比较），则应允许使用提供的标准品生成的甲醛标准曲线。

在 37°C 下短时间孵育 30 分钟后，在荧光酶标仪中于 510 nm 处读取荧光产物，激发波长为 450 nm。根据甲醛生成量测定 P450 活性。

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