5(6)-SFX（6-(荧光素-5-(和-6)-甲酰胺) 己酸琥珀酰亚胺酯），混合异构体

荧光素是一种常见的绿色荧光衍生化试剂，而琥珀酰亚胺酯经常用于标记蛋白、胺修饰的寡核苷酸及其他含胺分子的伯胺 (R-NH₂)。该“SFX”琥珀酰亚胺酯包含荧光基团和反应性基团之间的七原子氨基 - 己酰基间隔。该间隔可将荧光基团与其偶联的生物分子分离，可能减少通常在偶联时发生的淬灭作用。可利用标准 FITC 或 GFP 滤光片组检测产生的荧光素偶联物。荧光素染料及其偶联物具有相对较高的光漂白速率和 pH 值敏感的荧光。Alexa Fluor™ 488 和 Oregon Green™ 488 是替代染料，其光谱可模拟荧光素的光谱，更具光稳定性，在生理 pH 值范围内几乎无 pH 值敏感性。

规格：

• 荧光基团标记：荧光素

• 反应性基团：琥珀酰亚胺酯

• 反应性：蛋白和配体上的伯胺、胺修饰的寡核苷酸

• 分子量：586

• 消光系数：74,000 cm^-1M^-1

• 偶联物的激发/发射波长：494/520 nm

• 光谱相似染料：Alexa Fluor™ 488，GFP

典型偶联反应

胺反应性试剂可与几乎任何蛋白或肽偶联；提供的方案针对 IgG 抗体进行了优化。您可以针对任何量的蛋白按比例缩放反应，但为了获得最佳结果，蛋白的浓度应至少为 2 mg/mL。我们建议使用 3 种不同摩尔比的反应性试剂对蛋白进行 3 种不同程度的标记。

荧光素琥珀酰亚胺酯通常溶于高质量的无水二甲基甲酰胺 (DMF) 或二甲亚砜 (DMSO) 中，并在 0.1–0.2 M 碳酸氢钠缓冲液（pH 值 8.3）中于室温下进行反应，持续 1 小时。由于末端胺的 pKa 低于赖氨酸 ε-氨基基团的 pKa，因此您可以使用接近中性 pH 值的缓冲液对胺末端进行更具选择性的标记。

偶联物纯化

通常使用凝胶过滤柱（如 Sephadex™ G-25、BioGel™ P-30 或等效产品）将标记抗体与游离染料分离。对于更大或更小的蛋白，选择具有适当截留分子量的凝胶过滤介质或通过透析纯化。

替代包装

荧光素的混合异构体胺反应性琥珀酰亚胺酯也以 10 x 1 mg 单位规格 (F6129)、单异构体 (F6106) 和间隔比 SFX 间隔更具亲水性的形式 (F6130)，以及用于标记蛋白和核酸的大量试剂盒（用于标记蛋白和核酸的活性酯和试剂盒—表 1.2）的形式提供。