E-Gel™ 开盒器替换钢刀片

首先，检查你的琼脂糖凝胶的浓度。较高浓度的凝胶能帮助你分离较小分子量的分子，而较低百分比的凝胶能帮你分离较大分子量的分子。

每个泳道或者每个条带推荐的DNA上样量为20–100 ng。对于大部分E-Gel琼脂糖凝胶来说每个条带DNA上样量最多为500ng，而对于使用SYBR Safe染料的E-Gel凝胶，每条带的DNA的上样量最多为700ng。

完整RNA的28S:18S条带亮度比例应为2:1。你可能会在0.5 kb至9kb区间看到模糊的RNA拖尾条带，这表明样本中含有mRNA。请点击此处(https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/references/ambion-tech-support/rna-isolation/tech-notes/assessing-rna-quality.html)查看图片或了解更多评估RNA质量的信息。

对于非变性RNA电泳，我们推荐使用 E-Gel 预制胶电泳系统。请注意E-Gel 琼脂糖凝胶并不保证完全不含RNA酶。但是，我们许多用户经常使用E-Gels琼脂糖凝胶成功的完成了RNA分析。如果使用E-Gel琼脂糖凝胶进行RNA电泳，可以使用任何适用于非变性DNA电泳的上样缓冲液。
对于变性RNA电泳，可以从以下变性试剂中进行选择，包括甲醛、乙二醛、甲酰胺、甲基汞。变性条件会破坏氢键，因此RNA在电泳时没有二级结构，作为单链分子而迁移。
对变性RNA电泳，我们的E-Gel EX琼脂糖凝胶可以使用。唯一与E-Gel EX系统兼容的变性剂是甲酰胺，50-95%。使用其他变性剂会导致条带分离较差，带型也不理想。请注意，我们不建议将在RNA上样缓冲液中制备的样品与在水中制备的样品在同一凝胶上电泳。RNA上样缓冲液配方及变性电泳条件如下：

RNA上样缓冲液：
去离子化甲酰胺：200 μL
10X MOPS-EDTA-乙酸钠缓冲液（0.4 M MOPS, pH 7.0，0.1 M乙酸钠，10 mM EDTA)：40 μL
去离子化甲醛：76 μL
水：14 μL < br / > < br / > 变性电泳条件：< br / > 1. 将15 μL RNA上样缓冲液与1-5 μL RNA (1-5 μg)混合。< br / > 2. 在65摄氏度下加热10分钟使RNA变性。< br / > 3. 加热后立即将样品放在冰上。< br / > 4. 将全部样品加载到E-Gel EX琼脂糖凝胶上。
5. 电泳30分钟。

对于不用甲醛作为变性剂的RNA变性电泳，我们推荐使用 NorthernMax-Gly 试剂盒（货号AM1946）。使用此试剂盒时，RNA样本在乙二醛／DMSO上样缓冲夜中变性，然后在含有乙二醛的琼脂糖凝胶中进行电泳。

琼脂糖因为无毒、易用且分离范围大而被广泛使用。我们提供预制E-Gel琼脂糖凝胶，也提供试剂用于配制琼脂糖凝胶。聚丙烯酰胺凝胶通常用于对10–3,000bp大小的DNA分子进行高分辨率分析。我们提供预制Invitrogen TBE聚丙烯酰胺凝胶和UltraPure试剂。