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这最可能是因为蛋白质上样量过多,使检测超出线性范围。由于使用iBlot 2凝胶转印设备进行干转的免疫检测灵敏度高于半干转或湿转,我们建议您减少蛋白质上样量、使用更稀的抗体或缩短检测时间。您可能需要根据最初的结果进行一些优化。
这可能是因为使用了TBST缓冲液进行洗涤。我们建议使用PBST或WesternBreeze洗涤液。
这可能是因为PVDF膜变干或部分变干。PVDF膜的干燥部分比湿润部分颜色更白。应将膜置于100%甲醇中再次活化,并用水清洗,然后再放到转印膜组上。
这是因为上样孔周围的电场不均匀。应使用Blotting Roller将凝胶压平。为得到良好的效果,请遵循使用手册(https://tools.thermofisher.com/content/sfs/manuals/iblot2_device_man.pdf)第19页的建议。
如果转印时间过长,可能发生这种情况。我们建议逐渐缩短转印时间,每次减少30秒。 注意:预染标记物带有电荷,所以穿过膜的可能性比普通蛋白质更大。
如果转印时间过长,可能发生这种情况。我们建议逐渐缩短转印时间,每次减少30秒。